TiBC羅非(fei)魚(yu)腦(nao)細(xi)胞系(xi)
TiBC羅非(fei)魚(yu)腦(nao)細(xi)胞系(xi)作為(wei)針對羅(luo)非(fei)魚(yu)神(shen)經系(xi)統研(yan)究的(de)重要細(xi)胞模(mo)型(xing)，在水(shui)產養(yang)殖與(yu)魚(yu)類生(sheng)物學領(ling)域具有不(bu)可替代(dai)的(de)價值。它的(de)建立為探索羅(luo)非(fei)魚(yu)神(shen)經系(xi)統功能(neng)、病(bing)毒(du)感(gan)染(ran)機制(zhi)及神(shen)經相關疾病(bing)研(yan)究提(ti)供(gong)了(le)穩定的(de)體(ti)外(wai)模(mo)型(xing)，推(tui)動(dong)了(le)相關科研(yan)與(yu)應(ying)用(yong)的(de)發(fa)展。
羅(luo)非(fei)魚(yu)是熱(re)帶亞(ya)熱(re)帶地(di)區(qu)廣泛養(yang)殖的(de)淡水魚(yu)類，具有生(sheng)長迅(xun)速、耐低氧(yang)、適應(ying)性強等特點(dian)，是全(quan)球水產養(yang)殖的(de)支柱(zhu)品(pin)種(zhong)之(zhi)壹(yi)。腦(nao)部(bu)作為(wei)魚(yu)類神(shen)經系(xi)統的(de)核(he)心，負(fu)責調(tiao)控(kong)攝(she)食(shi)、繁殖(zhi)、應(ying)激(ji)反(fan)應等重要生命(ming)活動(dong)，而(er)腦(nao)細(xi)胞的(de)正常功能(neng)是(shi)維持這些生(sheng)理(li)過(guo)程(cheng)的(de)基(ji)礎。TiBC 細(xi)胞系(xi)源自(zi)羅(luo)非(fei)魚(yu)腦(nao)組(zu)織，尤其富(fu)集(ji)星(xing)形膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞，這(zhe)類細(xi)胞在(zai)神(shen)經支持、營(ying)養(yang)供(gong)應(ying)及(ji)免疫防(fang)禦(yu)中發(fa)揮關(guan)鍵作用，為研究羅非(fei)魚(yu)神(shen)經生物學特(te)性(xing)提(ti)供(gong)了(le)理(li)想(xiang)材(cai)料(liao)。
TiBC 羅(luo)非(fei)魚(yu)腦(nao)細(xi)胞系(xi)的(de)建立經過(guo)嚴(yan)格的(de)無菌操作流(liu)程(cheng)。選(xuan)取健(jian)康成(cheng)年羅非(fei)魚(yu)，經全身(shen)消(xiao)毒(du)後，在(zai)超(chao)凈(jing)工(gong)作(zuo)臺中解(jie)剖分(fen)離(li)腦(nao)組(zu)織，去除腦(nao)膜及(ji)血(xue)管(guan)等結締組(zu)織。將(jiang)腦(nao)組(zu)zhi剪碎(sui)成 1mm³ 左右的(de)小(xiao)塊(kuai)，用(yong)含抗(kang)菌成分的(de)緩沖液(ye)沖洗(xi) 4-5 次(ci)以(yi)去除血(xue)細(xi)胞，隨(sui)後加入細(xi)胞分(fen)散液(ye)處理(li) 25-30 分(fen)鐘，使(shi)細(xi)胞充分分(fen)散(san)。收集(ji)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)經 70μm 濾網(wang)過(guo)濾(lv)，1000r/min 離(li)心 5 分鐘後(hou)，用(yong)含 15% 胎(tai)牛(niu)血清(qing)的(de) L-15 培養(yang)液(ye)重懸(xuan)細(xi)胞，接(jie)種(zhong)於(yu)培養(yang)瓶(ping)中，置於(yu) 26℃恒溫(wen)培養(yang)箱進(jin)行原代(dai)培養(yang)。初(chu)期(qi)每(mei) 2 天更換(huan)壹(yi)半培養(yang)液(ye)，待(dai)細(xi)胞匯(hui)合度(du)達(da) 70%-80% 時(shi)進(jin)行傳代(dai)，目(mu)前已(yi)穩定傳代(dai)至(zhi) 45 代(dai)以(yi)上(shang)，細(xi)胞活力(li)保(bao)持(chi)在(zai) 85% 以(yi)上(shang)。
該(gai)細(xi)胞系(xi)呈現(xian)典(dian)型(xing)的(de)星(xing)形膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞形(xing)態特(te)征，細(xi)胞體(ti)呈多角形(xing)或星(xing)形，具有多個(ge)細(xi)長突起(qi)，常相互(hu)連接形(xing)成(cheng)網狀結構(gou)，貼(tie)壁(bi)生長能(neng)力(li)強。生(sheng)長特(te)性(xing)研(yan)究表(biao)明，TiBC 細(xi)胞在(zai) L-15 培養(yang)液(ye)中生(sheng)長狀態(tai)優(you)良，相較於(yu) DMEM 等培養(yang)基，細(xi)胞增(zeng)殖速度(du)提(ti)高約 20%；最適培養(yang)溫(wen)度(du)為 26-28℃，與(yu)羅(luo)非(fei)魚(yu)的(de)生(sheng)理(li)溫(wen)度(du)壹(yi)致；當(dang)胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)濃度(du)為 10%-12% 時(shi)，細(xi)胞群(qun)體(ti)倍(bei)增(zeng)時(shi)間(jian)最短，約為 60 小(xiao)時(shi)。傳代(dai)至(zhi) 30 代(dai)後(hou)，細(xi)胞形(xing)態與(yu)增(zeng)殖(zhi)速率(lv)無明顯(xian)變(bian)化(hua)，核(he)型分(fen)析(xi)顯(xian)示染(ran)色體數(shu)目(mu)穩定，表(biao)明其具有良好(hao)的(de)遺(yi)傳穩定性(xing)。
在(zai)功能(neng)特(te)性(xing)方面，TiBC 細(xi)胞系(xi)展現(xian)出顯著(zhu)的(de)神(shen)經細(xi)胞特(te)征。免疫熒光檢測顯示，細(xi)胞高(gao)表(biao)達(da)星(xing)形膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞標(biao)誌(zhi)物 GFAP（膠(jiao)質(zhi)纖(xian)維酸性蛋白(bai)），進(jin)壹(yi)步(bu)證(zheng)實(shi)了(le)其細(xi)胞類型(xing)屬(shu)性。該(gai)細(xi)胞系(xi)對羅(luo)非(fei)魚(yu)神(shen)經壞死(si)病(bing)毒(du)表(biao)現出高度(du)敏感(gan)性，感(gan)染(ran)後 24 小(xiao)時(shi)即可觀察(cha)到(dao)細(xi)胞變(bian)圓、聚(ju)集、脫落(luo)等典(dian)型(xing)病(bing)變(bian)，且病(bing)毒(du)滴度(du)隨時(shi)間(jian)顯著(zhu)升高(gao)，為研(yan)究該病(bing)毒(du)的(de)侵染(ran)機制(zhi)與(yu)抗(kang)病(bing)du藥(yao)物篩(shai)選(xuan)提(ti)供(gong)了(le)高效模(mo)型(xing)。此外(wai)，TiBC 細(xi)胞的(de)外(wai)源基(ji)因轉(zhuan)染(ran)效率(lv)可達(da) 35% 以(yi)上(shang)，通(tong)過(guo)轉(zhuan)染(ran)熒光報告(gao)基因，可清(qing)晰(xi)觀(guan)察(cha)到(dao)基(ji)因在(zai)神(shen)經細(xi)胞中的(de)表(biao)達(da)與(yu)定(ding)位，適用(yong)於(yu)神(shen)經相關基(ji)因的(de)功能(neng)研(yan)究。
TiBC 羅非(fei)魚(yu)腦(nao)細(xi)胞系(xi)在多個(ge)研(yan)究領域具有重要應用(yong)。在神(shen)經生理(li)學(xue)研究中，通(tong)過(guo)檢(jian)測細(xi)胞內(nei)鈣離子濃度(du)變(bian)化(hua)，揭示了(le)羅非(fei)魚(yu)應對溫(wen)度(du)脅迫時(shi)的(de)神(shen)經信號傳導(dao)機(ji)制(zhi)；在病(bing)毒(du)學(xue)研究中，利(li)用(yong)該細(xi)胞系(xi)成功分(fen)離(li)出羅非(fei)魚(yu)新型皰(pao)疹病(bing)毒(du)，並(bing)明確了(le)病(bing)毒(du)復(fu)制(zhi)的(de)關(guan)鍵(jian)階(jie)段；在藥(yao)物研發(fa)方面，建立了(le)基於(yu)細(xi)胞活性(xing)的(de)神(shen)經保護(hu)藥物篩(shai)選(xuan)模(mo)型(xing)，已(yi)篩(shai)選(xuan)出 3 種(zhong)具有潛在神(shen)經保護(hu)作用(yong)的(de)天(tian)然(ran)化(hua)合物。
作為(wei)首(shou)ge穩定建立的(de)羅(luo)非(fei)魚(yu)腦(nao)細(xi)胞系(xi)，TiBC 不(bu)僅填bu了(le)羅非(fei)魚(yu)神(shen)經細(xi)胞模(mo)型(xing)的(de)空(kong)白(bai)，更為(wei)魚(yu)類神(shen)經科學(xue)研(yan)究提(ti)供(gong)了(le)重要工具，助力(li)推(tui)動(dong)羅(luo)非(fei)魚(yu)健(jian)康養(yang)殖與(yu)水(shui)產動(dong)物神(shen)經生物學領(ling)域的(de)發(fa)展。
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