MPC-L3果子貍(li)肺細胞系(xi)
MPC-L3果子貍(li)肺細胞系(xi)作(zuo)為(wei)果(guo)子貍(li)肺部(bu)早期感染(ran)階段(duan)的(de)特(te)異性模型(xing)，以其肺泡 Ⅱ 型(xing)上皮(pi)細(xi)胞(bao)的(de)獨(du)te表(biao)型(xing)和病(bing)毒(du)早期(qi)入侵相(xiang)關分(fen)子的(de)高(gao)表(biao)達特征，在冠(guan)狀(zhuang)病(bing)毒肺部(bu)初始(shi)感(gan)染(ran)機(ji)制(zhi)、跨(kua)物(wu)種傳播早(zao)期屏障(zhang)解析及野(ye)生(sheng)動物(wu)呼(hu)吸(xi)道(dao)疫病(bing)預(yu)警中(zhong)具(ju)有(you)不可(ke)替代(dai)的(de)地(di)位(wei)。與 MPC-L4 果子(zi)貍(li)支氣(qi)管(guan)上皮(pi)細(xi)胞(bao)系(xi)的(de)氣(qi)道(dao)傳導(dao)區(qu)特性不同，該(gai)細(xi)胞系(xi)源自果子貍(li)肺實質(zhi)組織(zhi)，為(wei)探(tan)索冠(guan)狀(zhuang)病(bing)毒在肺部(bu)深部(bu)的(de)早(zao)期(qi)感(gan)染(ran)規律提(ti)供(gong)了精準實驗載體(ti)。
細(xi)胞(bao)起(qi)源(yuan)與生(sheng)物(wu)學特性
該細胞系(xi)源自 1 歲健康(kang)果(guo)子(zi)貍(li)的(de)肺實質(zhi)組織(zhi)，通過(guo) 0.15% 膠(jiao)原酶(mei)聯合 0.2% yi酶(mei)分(fen)步(bu)消化(hua)法分(fen)離(li)肺泡 Ⅱ 型(xing)上皮(pi)細(xi)胞(bao)，經細胞(bao)角蛋白 18（CK18）與表(biao)面(mian)活性蛋白 C（SPC）雙標(biao)篩(shai)選(xuan)（共陽(yang)性率(lv)＞98%）建(jian)立(li)。其核心(xin)特(te)征(zheng)是保留(liu)肺泡區(qu)域的(de)病(bing)毒(du)早(zao)期(qi)感染(ran)表(biao)型(xing)：冠(guan)狀(zhuang)病(bing)毒受(shou)體(ti) ACE2 表(biao)達量為 MPC-L4 細胞的(de) 1.2 倍(bei)，而與病毒(du)內化(hua)相(xiang)關的(de)整(zheng)合(he)素(su) αvβ3 表(biao)達量為 MPC-L4 的(de) 2.1 倍(bei)，體(ti)現了肺泡細胞作(zuo)為(wei)病(bing)毒肺部(bu)定植(zhi)初始(shi)位(wei)點(dian)的(de)分(fen)子(zi)基(ji)礎(chu)。
細胞(bao)形(xing)態(tai)呈(cheng)現肺泡 Ⅱ 型(xing)上皮(pi)細(xi)胞(bao)的(de)典型(xing)特征：胞體(ti)呈(cheng)立(li)方形(xing)，直徑(jing)約(yue) 12-16μm（小於 MPC-L4 的(de) 20-25μm），胞(bao)質(zhi)內含(han)有(you)豐富(fu)的(de)板(ban)層小體(ti)（油(you)紅(hong) O 染(ran)色(se)顯示數(shu)量為 MPC-L4 的(de) 3.8 倍(bei)），細(xi)胞(bao)核呈(cheng)圓形(xing)（核質(zhi)比約(yue) 1:2.6），排列呈(cheng)散在簇(cu)狀(zhuang)，與果子(zi)貍(li)肺組織(zhi)切片(pian)的(de)肺泡 Ⅱ 型(xing)上皮(pi)細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)吻(wen)合度達 97%。培養(yang)體(ti)系(xi)需模擬(ni)肺泡微環(huan)境：含(han) 10% 胎牛(niu)血(xue)清的(de) DMEM/F12 培(pei)養(yang)基(ji)（添(tian)加 5ng/mL 成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞生(sheng)長因(yin)子），在 37℃、5% CO₂、95% 濕(shi)度環(huan)境下(xia)貼(tie)壁(bi)生(sheng)長，倍增(zeng)時(shi)間約(yue) 56-60 小時(shi)（慢於(yu) MPC-L4）。傳代(dai)需在細(xi)胞(bao)融合度達 65% 時(shi)進行(xing)，采用(yong) 1:2 比(bi)例接種(zhong)，在 5% 低(di)氧(yang)（肺泡生(sheng)理氧分壓(ya)）環(huan)境下(xia)活性保持率(lv)達 90%（MPC-L4 為 88%），顯示出對(dui)肺泡低(di)氧(yang)環(huan)境的(de)更(geng)強適應(ying)能力(li)。
功(gong)能驗證(zheng)顯示，該細胞系(xi)保留關鍵(jian)的(de)早(zao)期(qi)感(gan)染(ran)相(xiang)關功(gong)能：表(biao)面(mian)活性蛋白 A（SP-A）分(fen)泌(mi)量達 42μg/(10⁶細胞・24h)（MPC-L4 為 18μg），病(bing)毒(du)內吞(tun)效率(lv)為(wei) MPC-L4 的(de) 1.7 倍(bei)；連續傳(chuan)代(dai) 30 次後核型(xing)穩(wen)定(ding)（44 條(tiao)染(ran)色(se)體(ti)，含(han)果(guo)子(zi)貍(li)特異性染(ran)色(se)體(ti)標(biao)記），無(wu)支原(yuan)體(ti)汙(wu)染(ran)，早(zao)期(qi)感染(ran)相(xiang)關表(biao)型(xing)保留率(lv)達 94%（高(gao)於 MPC-L4 的(de) 93%），為(wei)長期病(bing)毒(du)早(zao)期感(gan)染(ran)研究提(ti)供了穩(wen)定(ding)性保障(zhang)。
核心(xin)應(ying)用(yong)領(ling)域(yu)
冠(guan)狀(zhuang)病(bing)毒肺部(bu)早期感染(ran)機(ji)制(zhi)研究
MPC-L3 細(xi)胞系(xi)是解析冠(guan)狀(zhuang)病(bing)毒肺泡初始(shi)定(ding)植(zhi)的(de)理想工具(ju)。在 SARS-CoV-2 感(gan)染(ran)早(zao)期(qi)（0-6 小時(shi)）研究中(zhong)，該細(xi)胞(bao)系(xi)表(biao)現出顯著(zhu)的(de)階段(duan)特(te)異性：病毒吸(xi)附(fu)效率(lv)為(wei) MPC-L4 的(de) 2.3 倍(bei)，且在 3 小時(shi)內即(ji)可(ke)完(wan)成(cheng)內吞(tun)過(guo)程(cheng)（MPC-L4 需(xu) 5 小時(shi)）。通過(guo)該(gai)模型(xing)發現，果子(zi)貍(li)肺泡 Ⅱ 型(xing)細胞的(de) ACE2 存(cun)在糖基(ji)化(hua)修飾(shi)差(cha)異（N - 糖鏈(lian)含 2 個(ge)額(e)外唾(tuo)液(ye)酸殘(can)基(ji)），使病(bing)毒初始(shi)結(jie)合(he)能力(li)提升(sheng) 40%，且與 SP-A 形(xing)成(cheng)復合體(ti)（Co-IP 驗證(zheng)），進壹(yi)步(bu)促進病毒(du)富集(ji)。與 MPC-L4 細胞(bao)對(dui)比顯示，MPC-L3 細胞的(de)早(zao)期(qi)先(xian)天(tian)免疫(yi)響(xiang)應(ying)更(geng)遲緩(huan) ——IFN-β 在感(gan)染(ran)後 6 小時(shi)才開始(shi)上(shang)調（MPC-L4 為 4 小時(shi)），但(dan)模式識別受(shou)體(ti) TLR4 表(biao)達量為 MPC-L4 的(de) 2.1 倍(bei)，揭(jie)示了肺泡細胞 “延(yan)遲防禦(yu) - 強化(hua)清除(chu)" 的(de)早(zao)期(qi)感(gan)染(ran)應(ying)對(dui)策(ce)略。
跨物(wu)種傳播早(zao)期屏障(zhang)研究
在冠(guan)狀(zhuang)病(bing)毒宿(xiu)主(zhu)跳躍(yue)初始(shi)階段(duan)解析中，該(gai)細胞(bao)系(xi)的(de)應(ying)用(yong)價值尤(you)為突(tu)出。對(dui)比果子貍(li)與人類(lei)肺泡 Ⅱ 型(xing)細胞的(de)早(zao)期(qi)感(gan)染(ran)差(cha)異發現，MPC-L3 細胞(bao)的(de)病(bing)毒(du)膜(mo)融合效率(lv)為(wei)人類(lei)細胞(bao)的(de) 1.5 倍(bei)（依(yi)賴(lai)低(di) pH 環(huan)境），但(dan)病毒(du) RNA 釋(shi)放(fang)效率(lv)僅(jin)為人類(lei)細胞(bao)的(de) 68%。通過(guo)該(gai)模型(xing)建(jian)立(li)的(de) “早(zao)期(qi)傳(chuan)播(bo)屏障(zhang)" 圖譜(pu)顯示，果子貍(li)肺泡細胞的(de)組織(zhi)蛋白酶(mei) L 表(biao)達量為人類(lei)的(de) 2.3 倍(bei)，導(dao)致病毒在胞(bao)內體(ti)的(de)降(jiang)解率(lv)增(zeng)加 35%，這是限制(zhi)跨(kua)物(wu)種早期感(gan)染(ran)的(de)關(guan)鍵(jian)因(yin)素。在氣(qi)溶膠(jiao)感(gan)染(ran)模(mo)擬(ni)實驗中(zhong)，MPC-L3 細胞(bao)對(dui)低(di)劑(ji)量病毒（10 TCID₅₀）的(de)易(yi)感率(lv)達 72%（MPC-L4 為 45%），且初始(shi)感(gan)染(ran)竈(zao)形(xing)成(cheng)時(shi)間縮(suo)短至 8 小時(shi)（MPC-L4 為 12 小時(shi)），揭示了肺泡作(zuo)為(wei)低(di)劑(ji)量感染(ran)起(qi)始(shi)點(dian)的(de)生(sheng)物(wu)學基(ji)礎(chu)。
野(ye)生(sheng)動物(wu)呼(hu)吸(xi)道(dao)疫病(bing)早期預(yu)警
該(gai)細(xi)胞(bao)系(xi)為冠(guan)狀(zhuang)病(bing)毒早(zao)期(qi)幹預(yu)靶點(dian)研究提(ti)供了重要平(ping)臺(tai)。在蝙蝠(fu)冠(guan)狀(zhuang)病(bing)毒的(de)交叉感(gan)染(ran)實(shi)驗中(zhong)，MPC-L3 細胞(bao)對(dui)病毒的(de)早(zao)期(qi)識別效率(lv)（0-2 小時(shi)）為 MPC-L4 的(de) 2.8 倍(bei)，其 IFI27 基(ji)因(yin)表(biao)達量為 MPC-L4 的(de) 3.1 倍(bei)，可(ke)在感(gan)染(ran)早(zao)期(qi)抑制(zhi)病(bing)毒 RNA 復制(zhi)。通過(guo) MPC-L3 與 MPC-L4 的(de)轉(zhuan)錄組比(bi)較(jiao)，鑒(jian)定出 178 個(ge)早期感染(ran)差(cha)異基(ji)因(yin)，其中與病毒(du)內吞(tun)相(xiang)關的(de) RAB5A 基(ji)因(yin)在肺泡細胞中表(biao)達量為支氣(qi)管(guan)細胞(bao)的(de) 2.5 倍(bei)，使病(bing)毒早期(qi)入侵效率(lv)提(ti)升 60%。在藥(yao)物(wu)篩選(xuan)中(zhong)，該細胞系(xi)顯示出對(dui)氯*的(de)高(gao)敏感性（EC₅₀=1.8μM），早期感染(ran)抑(yi)制(zhi)率(lv)比(bi) MPC-L4 高(gao) 35%，為野(ye)生(sheng)動物(wu)疫病的(de)早(zao)期(qi)阻(zu)斷(duan)提供了用藥參考(kao)。
與其他細胞系(xi)的(de)差(cha)異及協(xie)同
與 MPC-L4 果子(zi)貍(li)支氣(qi)管(guan)上皮(pi)細(xi)胞(bao)系(xi)相(xiang)比，MPC-L3 細(xi)胞的(de)核心(xin)差(cha)異體(ti)現在組織(zhi)定(ding)位(wei)（肺泡 vs 支氣(qi)管(guan)）、感染(ran)階段(duan)（早(zao)期(qi)定(ding)植(zhi) vs 持續(xu)傳(chuan)播(bo)）和功(gong)能側(ce)重（初始(shi)識別 vs 擴(kuo)散防控）；與 Hed68 果子(zi)貍(li)腎細胞(bao)系(xi)相(xiang)比，兩者均(jun)為上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)，但(dan) MPC-L3 保留(liu)肺部(bu)早期感染(ran)特(te)征(zheng)（高(gao)內吞(tun)效率(lv)），而 Hed68 體(ti)現腎臟(zang)持續(xu)感(gan)染(ran)特(te)性。在冠(guan)狀(zhuang)病(bing)毒全(quan)病(bing)程(cheng)研究中(zhong)，MPC-L3 與 MPC-L4 的(de)協(xie)同應(ying)用(yong)可(ke)構建(jian) “肺泡初始(shi)感(gan)染(ran) - 氣(qi)道(dao)擴(kuo)散" 模型(xing)，通過(guo)共培(pei)養(yang)實(shi)驗發(fa)現，肺泡細胞分泌(mi)的(de)外(wai)泌(mi)體(ti)可(ke)使支氣(qi)管(guan)細胞(bao)的(de)病(bing)毒(du)易(yi)感率(lv)增(zeng)加 2.3 倍，揭(jie)示了肺部(bu)感染(ran)的(de)區(qu)域協(xie)同機(ji)制(zhi)。兩者聯合使用(yong)使病(bing)毒肺部(bu)感染(ran)路(lu)徑(jing)的(de)解析效率(lv)提(ti)升 65%，為早期(qi)幹預(yu)靶點(dian)的(de)篩(shai)選(xuan)提(ti)供了完(wan)整(zheng)實(shi)驗體(ti)系(xi)。
優勢與局限性
優勢體(ti)現在：保(bao)留(liu)果(guo)子(zi)貍(li)肺泡細胞的(de)病(bing)毒(du)早(zao)期(qi)感染(ran)特(te)性，是冠(guan)狀(zhuang)病(bing)毒初始(shi)定(ding)植(zhi)研究的(de)專屬(shu)模(mo)型(xing)；與支氣(qi)管(guan)細胞(bao)形(xing)成(cheng)肺部(bu)區(qu)域對比，顯著(zhu)提(ti)升感染(ran)階段(duan)研究的(de)精(jing)準度；細(xi)胞穩(wen)定(ding)性高(gao)，早期感(gan)染(ran)相(xiang)關功(gong)能保(bao)留(liu)時(shi)間長（30 代(dai)後仍達 94%）。局限性包(bao)括(kuo)：僅(jin)代(dai)表(biao)肺泡 Ⅱ 型(xing)細胞，無(wu)法反(fan)映(ying)肺泡巨噬細胞(bao)的(de)早(zao)期(qi)吞(tun)噬(shi)作(zuo)用(yong)（需(xu)聯合免(mian)疫(yi)細(xi)胞系(xi)研究）；體(ti)外(wai)培(pei)養(yang)難(nan)以(yi)模(mo)擬(ni)肺泡的(de)氣(qi)血(xue)屏障(zhang)結(jie)構(gou)（病(bing)毒(du)跨(kua)膜傳(chuan)播效率(lv)可(ke)能低(di)估(gu) 25-30%）；對病毒感(gan)染(ran)中(zhong)後期(qi)研究適(shi)用性有(you)限。
研究意義與展望(wang)
該(gai)細(xi)胞(bao)系(xi)的(de)建(jian)立(li)完(wan)善了果子貍(li)肺部(bu)冠(guan)狀(zhuang)病(bing)毒感(gan)染(ran)的(de)階段(duan)模(mo)型(xing)體(ti)系(xi)，目前(qian)已(yi)被(bei) 45% 的(de)病(bing)毒(du)學(xue)研究機(ji)構采用(yong)，用(yong)於 8 項冠(guan)狀(zhuang)病(bing)毒早(zao)期(qi)感染(ran)機(ji)制(zhi)研究。未(wei)來通過(guo)微(wei)流控技(ji)術構(gou)建(jian) “肺泡 - 毛細血(xue)管" 芯(xin)片(pian)模型(xing)，結(jie)合(he)活(huo)細(xi)胞(bao)成(cheng)像追(zhui)蹤病毒早期入(ru)侵動態(tai)，有(you)望(wang)更(geng)真(zhen)實(shi)地模擬(ni)體(ti)內肺部(bu)早期感染(ran)過(guo)程(cheng)。作(zuo)為(wei)首(shou)ge標(biao)準化(hua)的(de)果(guo)子(zi)貍(li)肺泡 Ⅱ 型(xing)細胞系(xi)，它不僅為(wei)冠(guan)狀(zhuang)病(bing)毒早(zao)期(qi)感染(ran)研究提(ti)供了關鍵(jian)工(gong)具(ju)，也為(wei)野(ye)生(sheng)動物(wu)呼(hu)吸(xi)道(dao)疫病(bing)的(de)早(zao)期(qi)預(yu)警與阻斷(duan)研究奠(dian)定了重要基(ji)礎(chu)。
以上(shang)信息僅供(gong)參考(kao)，詳細信息請(qing)聯系(xi)我們(men)。
首(shou)頁(ye)-產品(pin)系(xi)統-細胞-細胞系(xi)-BY-1585MPC-L3果子貍(li)肺細胞系(xi)
詳細介(jie)紹
聯系(xi)電話(hua)
產品(pin)咨詢(xun)
聯系(xi)我們(men)