Ca763小鼠(shu)乳(ru)腺癌瘤株(zhu)細胞系(xi)
Ca763小鼠(shu)乳(ru)腺癌瘤株(zhu)細胞系(xi)源自(zi) 615 近(jin)交系(xi)小鼠(shu)的自(zi)發性乳(ru)腺癌組織(zhi)，是具有高成瘤速(su)度和(he)多(duo)器(qi)官轉(zhuan)移特(te)性的(de)惡性腫(zhong)瘤模(mo)型(xing)，尤(you)其(qi)傾(qing)向(xiang)於肺(fei)和(he)骨(gu)組織轉(zhuan)移，在(zai)乳(ru)腺癌血行(xing)播(bo)散機制、器(qi)官特(te)異性轉(zhuan)移調(tiao)控(kong)及綜(zong)he治療策略(lve)研(yan)究(jiu)中具有重要價值(zhi)，為(wei)解(jie)析(xi)乳(ru)腺癌跨器(qi)官轉(zhuan)移的分(fen)子異質性提(ti)供了(le)du特(te)工(gong)具。
該細胞系(xi)呈現典(dian)型(xing)的(de)高(gao)度(du)惡性上(shang)皮(pi)細胞形(xing)態與(yu)表型(xing)特(te)征。顯(xian)微鏡下，細胞呈(cheng)長(chang)梭形(xing)或不(bu)規則形(xing)，貼壁(bi)生長(chang)為(wei)主(zhu)，部分(fen)細胞呈(cheng)半(ban)懸浮狀(zhuang)態(tai)，排(pai)列(lie)松(song)散無極性，細胞大小差(cha)異顯(xian)著(zhu)（直徑 10-25μm），核質比(bi)ji高(gao)，細胞核畸(ji)形(xing)明顯(xian)，可見多(duo)核、分(fen)葉(ye)核及(ji)巨(ju)核現象(xiang)，染(ran)色(se)質呈(cheng)粗顆粒(li)狀(zhuang)凝(ning)集(ji)，核仁(ren)明顯(xian)且數(shu)量(liang)多(duo)（3-4 個(ge)），核分(fen)裂(lie)象(xiang)活(huo)躍(yue)（每(mei) 10 個(ge)高倍視野 12-15 個(ge)），胞質少(shao)而(er)嗜(shi)堿性，可見大量絲狀(zhuang)偽(wei)足(zu)，電鏡下胞質內(nei)含(han)有豐(feng)富(fu)的(de)微絲束，細胞間(jian)連(lian)接極少(shao)，體(ti)現出(chu)強侵(qin)襲(xi)表型(xing)。免(mian)疫(yi)表型(xing)分(fen)析(xi)顯(xian)示(shi)，細胞高(gao)表達乳(ru)腺癌標(biao)誌(zhi)物(wu)細胞角蛋(dan)白(bai) 19（CK19）和(he)上(shang)皮(pi)細胞黏(nian)附(fu)分(fen)子（EpCAM），流式(shi)細胞術(shu)檢(jian)測陽性率(lv)分(fen)別(bie)達 90% 和(he) 85%，同時特(te)異性表達肺(fei)轉(zhuan)移相關(guan)分(fen)子 CD44v6 和骨(gu)轉移(yi)相(xiang)關(guan)分(fen)子 RANKL，其中 RANKL 在細胞表面的表達量(liang)較(jiao) Ca761 細胞高(gao) 4 倍，為(wei)其(qi)多(duo)器(qi)官轉(zhuan)移特(te)性提(ti)供分(fen)子基礎(chu)。
體(ti)外(wai)培養(yang)體(ti)系(xi)中，Ca763 細胞展(zhan)現出(chu)快(kuai)速增(zeng)殖能(neng)力(li)與(yu)強轉(zhuan)移(yi)潛(qian)能(neng)。最(zui)適培養(yang)條(tiao)件(jian)為含(han) 10% 胎牛血(xue)清(qing)的 RPMI 1640 培(pei)養(yang)基(ji)，在 37℃、5% CO₂環(huan)境下，傳代周期約(yue) 48 小(xiao)時，對(dui)數(shu)生(sheng)長(chang)期細胞活(huo)力(li)達 95% 以(yi)上(shang)，倍增(zeng)時間(jian)約(yue) 28 小(xiao)時，成(cheng)瘤速(su)度顯(xian)著(zhu)快(kuai)於 Ca761 細胞。其(qi)顯(xian)著(zhu)特(te)點是體(ti)外(wai)侵襲與遷(qian)移能(neng)力(li)ji強，Transwell 侵(qin)襲(xi)實(shi)驗中 24 小時穿(chuan)透基(ji)質膠(jiao)的(de)細胞數(shu)是 Ca761 細胞的(de) 1.8 倍，劃痕愈合實(shi)驗 12 小(xiao)時愈(yu)合率達 90%，這(zhe)種(zhong)高效(xiao)運動能(neng)力(li)與(yu)其(qi)高(gao)表達 MMP-2 和(he) MMP-9 相(xiang)關(guan)，酶譜(pu)分(fen)析(xi)顯(xian)示(shi)其 MMP 活(huo)性較(jiao) Ca759 細胞高(gao) 2.3 倍。軟(ruan)瓊(qiong)脂(zhi)克隆(long)形(xing)成率(lv)達 40%，克隆(long)形(xing)態不(bu)規則，邊(bian)緣呈放(fang)射狀(zhuang)突(tu)起(qi)，提(ti)示(shi)其高度惡性的(de)克隆(long)形(xing)成能(neng)力(li)。凍(dong)存復蘇性能(neng)優(you)異，液氮(dan)凍(dong)存後復蘇存活(huo)率(lv)超 90%，連(lian)續傳代 50 次(ci)後，多(duo)器(qi)官轉(zhuan)移相關(guan)分(fen)子表達及(ji)侵(qin)襲能(neng)力(li)無(wu)明顯(xian)衰減(jian)，保(bao)證實(shi)驗的(de)穩(wen)定性與(yu)可重復性。
Ca763 細胞的(de)核心(xin)價(jia)值(zhi)體(ti)現在(zai)其(qi)對多(duo)器(qi)官轉(zhuan)移過程的精準模(mo)擬。在動物(wu)模(mo)型(xing)中，將(jiang) 1×10⁶個(ge)細胞接種(zhong)於 615 小(xiao)鼠(shu)乳(ru)腺脂(zhi)肪(fang)墊(dian)，10 天(tian)即可形(xing)成可觸(chu)及的(de)原(yuan)發瘤，21 天(tian)肺(fei)轉(zhuan)移率達 80%（表現為(wei)雙(shuang)肺彌漫性小(xiao)結節(jie)），28 天(tian)骨(gu)轉(zhuan)移率達 65%（主(zhu)要累及(ji)股骨(gu)和(he)脛(jing)骨(gu)），轉移(yi)竈病(bing)理顯(xian)示(shi)腫(zhong)瘤細胞保(bao)留 CK19 表達，肺(fei)轉(zhuan)移竈可見肺泡(pao)間(jian)隙浸潤(run)，骨轉(zhuan)移竈則伴隨骨質破壞和破骨細胞聚集(ji)。通(tong)過(guo)熒光(guang)標(biao)記追蹤發現，腫(zhong)瘤細胞經血管播(bo)散後，在肺組(zu)織(zhi)通過(guo) CD44v6 與(yu)肺泡(pao)上(shang)皮(pi)細胞黏(nian)附(fu)定植，在(zai)骨(gu)組織(zhi)通過(guo) RANKL 與破骨細胞相(xiang)互(hu)作(zuo)用(yong)促(cu)進(jin)溶(rong)骨(gu)環境形(xing)成，這(zhe)種(zhong) "血管侵襲 - 器(qi)官定(ding)植 - 微環境改(gai)造(zao)" 的轉(zhuan)移模(mo)式，與人類(lei)乳(ru)腺癌多(duo)器(qi)官轉(zhuan)移的臨(lin)床(chuang)特(te)征高(gao)度壹致。
在(zai)肺轉(zhuan)移(yi)機制研(yan)究(jiu)中，該細胞系(xi)揭示(shi)了器(qi)官特(te)異性黏(nian)附(fu)的分(fen)子機制。細胞高(gao)表達 CD44v6，可與肺組織(zhi)特(te)異性表達的(de)透明質酸(suan)結(jie)合(he)，流(liu)式細胞術(shu)檢(jian)測顯(xian)示(shi)其與肺微血管內皮細胞的(de)黏(nian)附(fu)率達 50%，是與(yu)腎內皮(pi)細胞黏(nian)附(fu)率的 3 倍，沈(chen)默(mo) CD44v6 後，肺轉移(yi)率(lv)降至 30%，同時細胞對(dui)透明質酸(suan)的(de)結(jie)合(he)能(neng)力(li)下降 70%。基(ji)因芯片(pian)分(fen)析(xi)顯(xian)示(shi)，肺轉移竈細胞中 CXCR4 表達上(shang)調(tiao)，與(yu)肺組織高(gao)表達的(de) CXCL12 形(xing)成趨(qu)化(hua)軸，促(cu)進(jin)腫(zhong)瘤細胞在(zai)肺(fei)內增殖(zhi)，CXCR4 拮抗(kang)劑(ji)處(chu)理(li)可使(shi)肺(fei)轉移竈數(shu)量(liang)減(jian)少(shao) 60%。
在(zai)骨(gu)轉(zhuan)移機制研(yan)究(jiu)中，Ca763 細胞通(tong)過(guo) RANKL-RANK 通路(lu)調(tiao)控(kong)骨微環境。細胞分(fen)泌的(de) RANKL 可激(ji)活(huo)破骨細胞的(de) NF-κB 通(tong)路(lu)，促(cu)進(jin)骨(gu)吸(xi)收，骨(gu)片(pian)共(gong)培養(yang)實(shi)驗顯(xian)示(shi)其可使(shi)破骨細胞活(huo)性增(zeng)加 2.5 倍，骨(gu)吸(xi)收陷(xian)窩面積(ji)擴大 3 倍，而(er) RANKL 抗(kang)體(ti)處(chu)理(li)可wan全(quan)阻斷(duan)這種(zhong)作(zuo)用(yong)。此(ci)外(wai)，骨基質釋(shi)放(fang)的(de) TGF-β 可反過(guo)來(lai)刺激(ji)腫(zhong)瘤細胞分(fen)泌更(geng)多(duo) RANKL，形(xing)成 "腫(zhong)瘤細胞 - 破骨細胞" 惡(e)性循(xun)環，TGF-β 受(shou)體(ti)抑(yi)制劑(ji)處(chu)理(li)可使(shi)骨(gu)轉移率(lv)下降 45%，證實(shi)該(gai)環路(lu)在骨轉(zhuan)移中的核心(xin)作(zuo)用(yong)。
在(zai)腫(zhong)瘤微環境研(yan)究(jiu)中，該細胞系(xi)與不(bu)同器(qi)官基(ji)質細胞的(de)相(xiang)互(hu)作(zuo)用(yong)為(wei)解(jie)析(xi)轉移(yi)微環境提供了(le)線索(suo)。與肺(fei)成(cheng)纖(xian)維細胞共(gong)培(pei)養(yang)時，可誘導(dao)其分(fen)泌 IL-8，促(cu)進(jin)腫(zhong)瘤細胞增(zeng)殖(zhi)，使(shi)克隆(long)形(xing)成率(lv)提升(sheng) 40%；與骨髓間(jian)充(chong)質幹(gan)細胞共(gong)培(pei)養(yang)時，可上(shang)調(tiao)腫(zhong)瘤細胞的(de) survivin 表達，雕(diao)亡(wang)率(lv)下降 50%。在(zai)缺(que)氧條(tiao)件(jian)下，細胞 HIF-1α 表達顯(xian)著(zhu)上(shang)調(tiao)，誘導(dao)血管內皮生(sheng)長(chang)因(yin)子（VEGF）分(fen)泌增(zeng)加，促(cu)進(jin)血(xue)管生成，條(tiao)件(jian)培養(yang)基(ji)可使(shi)血(xue)管內皮細胞管腔形(xing)成數(shu)增(zeng)加(jia) 3 倍，為(wei)血(xue)行(xing)轉(zhuan)移(yi)提供通(tong)道(dao)。
在(zai)藥(yao)物(wu)篩選(xuan)應用中，Ca763 細胞是評(ping)估多(duo)器(qi)官抗(kang)轉(zhuan)移藥(yao)物(wu)的(de)理(li)想模型(xing)。體(ti)外(wai)實(shi)驗顯(xian)示(shi)，細胞對(dui)紫(zi)shan醇的(de) IC50 為(wei) 0.8μM，聯合使(shi)用(yong) RANKL 抗(kang)體(ti)後，骨轉移(yi)相(xiang)關(guan)基因(yin)表達下降 55%；體(ti)內實(shi)驗中，紫(zi)shan醇與(yu) CXCR4 拮(jie)抗(kang)劑(ji)聯(lian)用(yong)可使(shi)肺(fei)轉移率(lv)從 80% 降(jiang)至 35%，與 RANKL 抗(kang)體(ti)聯用(yong)可使(shi)骨(gu)轉移率(lv)從 65% 降(jiang)至 25%，證實(shi)聯(lian)合靶向(xiang)治療對多(duo)器(qi)官轉(zhuan)移的抑(yi)制作(zuo)用(yong)。某天(tian)然(ran)藥(yao)物(wu)提(ti)取(qu)物(wu)處(chu)理(li)後，細胞 MMP 活(huo)性下降 60%，肺(fei)和骨(gu)轉(zhuan)移(yi)竈數(shu)量(liang)分(fen)別(bie)減(jian)少(shao) 50% 和(he) 45%，顯(xian)示(shi)出廣譜抗(kang)轉(zhuan)移潛(qian)力(li)。
在(zai)激(ji)素相(xiang)關(guan)性研(yan)究(jiu)中，Ca763 細胞表現為(wei)雌(ci)激(ji)素受(shou)體(ti)（ER）和孕(yun)激(ji)素受(shou)體(ti)（PR）雙(shuang)陰性，屬於三陰(yin)性乳(ru)腺癌模型(xing)，不(bu)受(shou)激(ji)素調(tiao)控(kong)影響，細胞增(zeng)殖(zhi)和轉移(yi)能(neng)力(li)主(zhu)要依賴 EGFR 和(he) HER2 信號通(tong)路(lu)，HER2 抗(kang)體(ti)處(chu)理(li)可使(shi)細胞增(zeng)殖(zhi)率下降 40%，轉(zhuan)移能(neng)力(li)下降 50%，為(wei)三陰(yin)性乳(ru)腺癌的靶(ba)向(xiang)治療研(yan)究(jiu)提(ti)供了(le)實(shi)驗基(ji)礎(chu)。
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