HB 11A-A11小鼠雜(za)交(jiao)瘤細(xi)胞(bao)系(xi)
HB 11A-A11小鼠雜(za)交(jiao)瘤細(xi)胞(bao)系(xi)是單(dan)克(ke)隆抗體(ti)制(zhi)備與(yu)免(mian)疫(yi)相(xiang)關研究(jiu)的重(zhong)要細(xi)胞(bao)模(mo)型，以(yi)穩(wen)定分泌特異性(xing)抗體(ti)、良好的體(ti)外增殖(zhi)能力(li)及明確的(de)抗(kang)原(yuan)識(shi)別(bie)特性(xing)為顯著(zhu)優(you)勢(shi)，在生(sheng)物(wu)分子(zi)檢(jian)測、疾病(bing)診(zhen)斷(duan)及免(mian)疫(yi)學(xue)機(ji)制(zhi)研究(jiu)中應用廣(guang)泛，為單克(ke)隆抗體(ti)的(de)研發(fa)與應(ying)用提供(gong)了可(ke)靠(kao)的(de)細(xi)胞(bao)資(zi)源(yuan)。
來源(yuan)與背景：該細(xi)胞(bao)系(xi)源(yuan)於(yu) BALB/c 小鼠脾(pi)臟(zang) B 淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao)與(yu)骨髓(sui)瘤細(xi)胞(bao)的(de)融合(he)產(chan)物，通(tong)過(guo)雜交(jiao)瘤技術篩選克(ke)隆獲得(de)。其建立(li)過(guo)程是(shi)將經(jing)特定抗原(yuan)免(mian)疫(yi)的(de)小鼠脾(pi)臟(zang) B 淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao)與(yu)具有無限(xian)增(zeng)殖(zhi)能(neng)力(li)的骨髓瘤細(xi)胞(bao)融(rong)合(he)，經(jing)多次(ci)篩(shai)選(xuan)得(de)到能(neng)穩(wen)定分泌針對(dui)該抗原(yuan)的(de)單克(ke)隆抗體(ti)的(de)細(xi)胞(bao)系(xi)。這壹細(xi)胞(bao)系(xi)的成(cheng)功(gong)構(gou)建(jian)，解(jie)決了(le)多(duo)克(ke)隆抗體(ti)特異性(xing)差(cha)、批間(jian)差(cha)異(yi)大的(de)問題，為獲得(de)均(jun)壹性(xing)高、特異性(xing)強的(de)抗體(ti)提(ti)供了有效(xiao)途(tu)徑，自建立(li)以(yi)來，在免(mian)疫(yi)檢(jian)測等領(ling)域(yu)發(fa)揮了(le)重(zhong)要作(zuo)用。
細(xi)胞(bao)特性(xing)：形態(tai)上呈現典(dian)型的雜(za)交(jiao)瘤細(xi)胞(bao)形態(tai)，貼(tie)壁(bi)生(sheng)長時多為上皮(pi)樣(yang)，細(xi)胞(bao)呈多邊形或(huo)短(duan)梭形，細(xi)胞(bao)質(zhi)豐富(fu)，細(xi)胞(bao)核(he)較(jiao)大且(qie)清晰，核(he)質(zhi)比(bi)約 1:2.2，約 7% 的細(xi)胞(bao)可(ke)見(jian)雙(shuang)核(he)，體(ti)現(xian)了雜交瘤細(xi)胞(bao)的(de)融合(he)特征。核(he)心特性(xing)突出(chu)：抗體(ti)分(fen)泌穩(wen)定，分泌量(liang)達(da) 8-14μg/10⁶細(xi)胞(bao) / 24h，連續(xu)傳(chuan)代 55 次(ci)後(hou)，抗(kang)體(ti)分(fen)泌能力下(xia)降(jiang)幅(fu)度僅為 10%，穩(wen)定性(xing)優(you)於(yu)多數普(pu)通(tong)雜(za)交(jiao)瘤細(xi)胞(bao)系(xi)；抗原(yuan)結(jie)合(he)特異性(xing)優(you)異，與靶抗(kang)原(yuan)的(de)結(jie)合(he)常數（Kd）達(da) 10⁻⁹M 級別(bie)，與(yu)其他類(lei)似抗原(yuan)的(de)交叉反(fan)應率低(di)於(yu) 1.2%，保證(zheng)了檢(jian)測結(jie)果的可靠性(xing)；增殖能力(li)良好，體(ti)外培養倍增時間約 54-60 小時，克(ke)隆形成(cheng)率(lv) 35%，腹(fu)腔(qiang)接(jie)種(zhong) BALB/c 小鼠後(hou)，14-20 天可形成(cheng)腹(fu)水(shui)，腹(fu)水(shui)中抗體(ti)濃(nong)度為 2-6mg/ml，便於(yu)大量(liang)獲取(qu)抗(kang)體(ti)。傳(chuan)代時采用常規處(chu)理(li)方法，傳(chuan)代比(bi)例 1:3-1:4，當細(xi)胞(bao)密度達(da)到 70%-75% 時需及時傳(chuan)代，過(guo)度密集(ji)會(hui)使(shi)抗體(ti)分(fen)泌量(liang)下降(jiang)約 20%。
培養條件：適宜采用含 10% 胎(tai)牛(niu)血(xue)清的 RPMI-1640 培養基，添加 1% 雙(shuang)抗，培(pei)養環境需維持在 37℃、5% CO₂飽和(he)濕度。關鍵培(pei)養要點(dian)：血(xue)清質(zhi)量(liang)至關重(zhong)要，應(ying)選(xuan)用低(di)內(nei)毒(du)素胎(tai)牛(niu)血(xue)清（<0.3EU/ml），劣質(zhi)血(xue)清會導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)活(huo)力降(jiang)低(di) 28%，抗(kang)體(ti)分(fen)泌量(liang)減少 35%；無(wu)血(xue)清培養適應(ying)性(xing)較(jiao)好，在無(wu)血(xue)清培養基中添加適量(liang)的胰島素(su)、轉鐵(tie)蛋(dan)白等營(ying)養因子(zi)，可(ke)維(wei)持細(xi)胞(bao)正常生長，且抗(kang)體(ti)純(chun)度能提(ti)高至 94% 以(yi)上，有利(li)於(yu)後續的抗(kang)體(ti)純(chun)化(hua)；腹(fu)水(shui)制(zhi)備有(you)規範流程(cheng)，小鼠腹(fu)腔(qiang)預(yu)先(xian)註射(she)降(jiang)植烷(wan)，7 天後接種(zhong) 1.2×10⁷個細(xi)胞(bao)，16-22 天收(shou)集(ji)腹(fu)水(shui)，每(mei)只小鼠可(ke)收(shou)獲 3-5ml 腹(fu)水(shui)，腹(fu)水(shui)經(jing)處(chu)理(li)後(hou)抗(kang)體(ti)活(huo)性(xing)穩(wen)定。凍存采(cai)用含 10% DMSO 的(de)胎牛(niu)血(xue)清凍存液(ye)，程(cheng)序降(jiang)溫(wen)後(hou)液(ye)氮保存，復(fu)蘇(su)後(hou) 48 小時貼(tie)壁(bi)率(lv)達(da) 78%，抗體(ti)分(fen)泌功(gong)能(neng)恢復 83% 以(yi)上。
檢(jian)測鑒定：經(jing)微生(sheng)物(wu)檢(jian)測，無細(xi)菌、真(zhen)菌、支(zhi)原(yuan)體(ti)汙(wu)染，符(fu)合(he)雜(za)交瘤細(xi)胞(bao)的(de)質(zhi)量(liang)標(biao)準。抗體(ti)亞(ya)型鑒定為 IgG2b 型，輕鏈(lian)為 κ 型；通(tong)過(guo) ELISA、免(mian)疫(yi)印(yin)跡等方法驗證(zheng)，該抗體(ti)能(neng)特異性(xing)結(jie)合(he)靶抗(kang)原(yuan)，無(wu)明顯交(jiao)叉(cha)反(fan)應。染色體(ti)核(he)型分析顯示(shi)，其染色(se)體(ti)數目(mu)為 82-92 條，融(rong)合(he)了(le)親(qin)本(ben) B 淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao)與(yu)骨髓(sui)瘤細(xi)胞(bao)的(de)染色(se)體(ti)特征，符(fu)合(he)雜(za)交瘤細(xi)胞(bao)的(de)遺傳(chuan)學(xue)特性(xing)。功(gong)能(neng)驗證(zheng)中，將該抗體(ti)用於(yu)免(mian)疫(yi)熒光檢(jian)測，能特異性(xing)識別(bie)樣(yang)本(ben)中的靶抗(kang)原(yuan)，熒光信號(hao)集(ji)中，背景幹(gan)擾(rao)小，證(zheng)明其在免(mian)疫(yi)檢(jian)測中的實用性(xing)。
應用領域(yu)：在生(sheng)物(wu)分子(zi)檢(jian)測方面(mian)，基(ji)於(yu)該細(xi)胞(bao)系(xi)分泌(mi)的抗體(ti)構(gou)建(jian)的(de)檢(jian)測試劑(ji)盒(he)，對(dui)靶分(fen)子(zi)的(de)檢(jian)測靈敏(min)度達(da) 0.4ng/ml，線(xian)性(xing)範圍(wei)廣(guang)，適用於(yu)多種(zhong)樣(yang)本(ben)類型中靶分(fen)子(zi)的(de)定量(liang)分析；在疾(ji)病(bing)診(zhen)斷(duan)研(yan)究(jiu)中，利(li)用該抗體(ti)開(kai)發(fa)的免(mian)疫(yi)層(ceng)析試紙條，可(ke)快(kuai)速檢(jian)測相關疾病(bing)標(biao)誌(zhi)物(wu)，檢(jian)測時間僅(jin)需 15 分鐘(zhong)，準確率(lv)達(da) 89% 以(yi)上。在免(mian)疫(yi)學(xue)機(ji)制(zhi)研究(jiu)中，可用於(yu)探(tan)究(jiu)抗原(yuan)與(yu)抗體(ti)的(de)相互作(zuo)用，通(tong)過(guo)分析兩者的(de)結(jie)合(he)位點(dian)，為理解(jie)免(mian)疫(yi)反(fan)應的分子(zi)機(ji)制(zhi)提供(gong)線(xian)索。此外，該細(xi)胞(bao)系(xi)可用於(yu)優(you)化抗體(ti)生(sheng)產工藝，通(tong)過(guo)調(tiao)整(zheng)懸(xuan)浮(fu)培(pei)養的條件，能(neng)使(shi)抗體(ti)產(chan)量(liang)提升(sheng) 1.4-2 倍(bei)，有助(zhu)於(yu)降(jiang)低(di)抗(kang)體(ti)規模(mo)化生(sheng)產的(de)成本(ben)。
與其他雜(za)交(jiao)瘤細(xi)胞(bao)系(xi)相比(bi)，HB 11A-A11 細(xi)胞(bao)系(xi)的優(you)勢(shi)在於(yu)抗體(ti)分(fen)泌穩(wen)定性(xing)強、傳(chuan)代壽(shou)命較(jiao)長，且在不同(tong)培(pei)養條件下抗(kang)體(ti)的(de)特異性(xing)變化較(jiao)小，適合(he)用於(yu)標(biao)準化抗體(ti)的(de)制(zhi)備。通(tong)過(guo)該細(xi)胞(bao)系(xi)的應(ying)用，已助(zhu)力開(kai)發(fa)出(chu)多種(zhong)免(mian)疫(yi)檢(jian)測工具，廣(guang)泛應用於(yu)科研實驗和(he)臨(lin)床診(zhen)斷(duan)，為免(mian)疫(yi)學(xue)研究(jiu)及相關疾病(bing)的檢(jian)測提供(gong)了(le)有力支(zhi)持。
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