HB MO-3小(xiao)鼠雜交(jiao)瘤細胞系(xi)
HB MO-3小(xiao)鼠雜交(jiao)瘤細胞系(xi)是(shi)特(te)異(yi)性抗體制備(bei)與抗原檢測領(ling)域(yu)的(de)重(zhong)要(yao)細胞模(mo)型(xing)，憑借(jie)穩(wen)定(ding)的抗體分(fen)泌(mi)能力、出(chu)色的抗原識別特(te)異(yi)性及良(liang)好(hao)的體外(wai)培(pei)養性(xing)能，在(zai)特(te)定(ding)疾病(bing)分(fen)子(zi)檢(jian)測(ce)、免(mian)疫(yi)診斷(duan)試(shi)劑研(yan)發及相(xiang)關免疫(yi)學研(yan)究中(zhong)應用廣(guang)泛(fan)，為獲取高質量(liang)單(dan)克(ke)隆(long)抗體及功(gong)能探索(suo)提供(gong)了(le)可靠(kao)支(zhi)撐。
來源與背景：該細(xi)胞系(xi)源(yuan)於(yu) BALB/c 小鼠脾臟(zang) B 淋巴(ba)細(xi)胞與骨髓瘤細胞的(de)融(rong)合產物，通過(guo)經(jing)典(dian)雜交(jiao)瘤技術篩(shai)選(xuan)克(ke)隆(long)獲得(de)。建(jian)立過(guo)程(cheng)是(shi)將(jiang)經(jing)特(te)定(ding)抗原免疫(yi)後的(de)小鼠(shu) B 淋巴(ba)細(xi)胞與永生(sheng)化骨(gu)髓瘤細胞融(rong)合，利(li)用 HAT 培(pei)養(yang)基(ji)篩選(xuan)成功(gong)融(rong)合的(de)雜交(jiao)瘤細胞，再經(jing)有限稀釋法(fa)克(ke)隆(long)和抗體特(te)異(yi)性檢測，最(zui)終(zhong)得(de)到能穩(wen)定(ding)分(fen)泌(mi)針對(dui)目標(biao)抗原的單(dan)克(ke)隆(long)抗體的細胞株。這壹過(guo)程(cheng)有效解(jie)決了(le)多克(ke)隆(long)抗體特(te)異(yi)性不足(zu)、成分(fen)復(fu)雜的(de)問題(ti)，為獲得(de)均壹性高、靶向性強(qiang)的抗體提供(gong)了(le)穩(wen)定(ding)來源，自建(jian)立以(yi)來，在(zai)相(xiang)關疾病(bing)免疫(yi)檢測(ce)方法(fa)的構建(jian)中作(zuo)用顯(xian)著(zhu)。
細胞特(te)性(xing)：形態呈(cheng)現典(dian)型(xing)雜交(jiao)瘤細胞特(te)征(zheng)，貼壁生(sheng)長時(shi)為上(shang)皮(pi)樣(yang)多(duo)邊形，細胞質(zhi)含與抗原識別相(xiang)關的顆(ke)粒，細胞核(he)大而(er)圓(yuan)，核(he)質比(bi)約 1:2.3，約(yue) 5% 的細胞可(ke)見(jian)雙(shuang)核(he)結構。核(he)心特(te)性(xing)突出(chu)：抗體分(fen)泌(mi)穩(wen)定(ding)高效，分(fen)泌(mi)量達(da) 5-11μg/10⁶細胞 / 24h，連續傳代(dai) 54 次(ci)後(hou)，抗體分(fen)泌(mi)能力僅(jin)下(xia)降 8%；抗原結合特(te)異(yi)性高，與靶抗原的結合常(chang)數(shu)（Kd）達 10⁻⁹M 級(ji)別，與同(tong)源抗原交(jiao)叉(cha)反(fan)應率低(di)於(yu) 0.8%；增殖能力穩(wen)健(jian)，體外培養倍(bei)增(zeng)時(shi)間約(yue) 52-59 小時(shi)，克(ke)隆(long)形成率(lv) 36%，腹(fu)腔接種 BALB/c 小(xiao)鼠(shu)後(hou)，13-20 天(tian)形成腹(fu)水(shui)，腹水(shui)中抗體濃度達 2-5mg/ml。傳代(dai)采(cai)用常(chang)規方(fang)法(fa)，傳代(dai)比(bi)例 1:3-1:4，細(xi)胞密度達 70%-75% 時(shi)及時(shi)傳代(dai)，過(guo)度密集(ji)會使(shi)抗體分(fen)泌(mi)量下(xia)降 16% 左(zuo)右(you)。
培養(yang)條(tiao)件(jian)：適(shi)宜采用含 10% 胎牛血(xue)清(qing)的(de) RPMI-1640 培養基(ji)，添加 1% 抗生(sheng)素及 0.2% 特(te)定(ding)抗原相(xiang)關組(zu)織(zhi)提取(qu)液，培(pei)養(yang)環境為 37℃、5% CO₂飽和濕度。關鍵要(yao)點明確(que)：血(xue)清(qing)質(zhi)量關鍵，需用低(di)內(nei)毒(du)素(su)胎牛血(xue)清(qing)（<0.3EU/ml），劣質血(xue)清(qing)會(hui)使(shi)細(xi)胞活(huo)力降低(di) 24%，抗體分(fen)泌(mi)量減(jian)少(shao) 30%；添加物作用顯(xian)著(zhu)，特(te)定(ding)組(zu)織(zhi)提取(qu)液可(ke)維(wei)持抗體靶向性，缺(que)失會(hui)導致抗體與靶抗原結合率(lv)下(xia)降 20%；無血(xue)清(qing)培(pei)養適(shi)配性(xing)較(jiao)好(hao)，添加適(shi)量(liang)胰(yi)島(dao)素、轉鐵蛋(dan)白及相(xiang)關生(sheng)長因(yin)子(zi)可(ke)維(wei)持細胞生(sheng)長，抗體純度達 91% 以(yi)上(shang)；腹(fu)水(shui)制備(bei)規範，小鼠(shu)腹腔預先註(zhu)射(she)降植(zhi)烷，7 天(tian)後(hou)接種 1.0×10⁷個細胞，14-20 天(tian)收(shou)集(ji)腹水(shui)，每(mei)只(zhi)收(shou)獲(huo) 1-5ml，純化後(hou)仍保持對靶抗原的高親和(he)力。凍(dong)存用含 10% DMSO 的胎牛血(xue)清(qing)凍(dong)存液，程(cheng)序(xu)降溫(wen)後(hou)液氮(dan)保存(cun)，復(fu)蘇(su)後 48 小時(shi)貼(tie)壁率(lv)達(da) 75%，抗體分(fen)泌(mi)功(gong)能恢復(fu) 80% 以(yi)上(shang)。
檢(jian)測(ce)鑒(jian)定：經(jing)嚴格(ge)微生(sheng)物檢測，無細菌、真菌、支(zhi)原體(ti)汙(wu)染，符(fu)合雜交(jiao)瘤細胞質(zhi)量(liang)標(biao)準。抗體亞(ya)型(xing)為 IgG1 型(xing)，輕鏈為 κ 型(xing)；通過(guo) ELISA、免(mian)疫(yi)印跡(ji)等驗(yan)證，能特(te)異(yi)性結合靶(ba)抗原，交(jiao)叉(cha)反(fan)應率低(di)；染色體核(he)型(xing)分(fen)析(xi)顯示(shi)，染色體數(shu)目 80-90 條(tiao)，融(rong)合親(qin)本(ben)細胞染色體特(te)征(zheng)；功(gong)能驗證(zheng)中，用於(yu)相(xiang)關組(zu)織(zhi)切片免(mian)疫(yi)染色時(shi)，陽(yang)性(xing)信號清(qing)晰(xi)，背景幹擾低(di)，證實(shi)其(qi)實(shi)用性(xing)。
應用領(ling)域(yu)：在(zai)相(xiang)關疾病(bing)分(fen)子(zi)檢(jian)測(ce)中(zhong)，基(ji)於(yu)其抗體構建(jian)的 ELISA 試(shi)劑盒(he)，檢測(ce)靈敏度達 0.6ng/ml，適(shi)用於(yu)多種樣(yang)本(ben)中靶(ba)抗原的定量(liang)分(fen)析(xi)；在(zai)診斷(duan)試(shi)劑研(yan)發中(zhong)，開(kai)發(fa)的(de)免疫(yi)熒光(guang)探針(zhen)用於(yu)病(bing)理(li)切片檢(jian)測，診斷(duan)符(fu)合率(lv)達 87%。在(zai)免(mian)疫(yi)學研(yan)究中(zhong)，可(ke)用於(yu)抗原表位分(fen)析(xi)，為疫(yi)苗設(she)計提供(gong)參考。此外(wai)，該細(xi)胞系(xi)可(ke)優化抗體生(sheng)產工藝，提升產量(liang) 1.1-1.6 倍(bei)，降低(di)規模(mo)化生(sheng)產成本(ben)，為相(xiang)關疾病(bing)精準診斷(duan)及研(yan)究提供(gong)有力支(zhi)持。
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