A875人黑色素瘤細胞系(xi)
A875人黑色素瘤細胞系(xi)自建立(li)以(yi)來，成為(wei)黑(hei)色素瘤基礎研究與藥物(wu)開發的(de)重要模型。該(gai)細胞系(xi)源於(yu)人體黑(hei)色素瘤組(zu)織(zhi)，因(yin)其(qi)du特的(de)生(sheng)物(wu)學(xue)特性，為(wei)揭(jie)示(shi)黑色素瘤惡(e)性進(jin)展(zhan)機制、評(ping)估抗(kang)癌(ai)藥物(wu)療效提(ti)供(gong)了(le)關(guan)鍵研究對象(xiang)。
在細胞生物學(xue)特性上，A875 細胞呈梭形(xing)或(huo)不(bu)規(gui)則(ze)多(duo)邊(bian)形(xing)，具(ju)有(you)典(dian)型的(de)上皮 - 間質轉(zhuan)化（EMT）特征(zheng)，細胞極(ji)性喪失，間(jian)質(zhi)標(biao)誌(zhi)物(wu)波形蛋白（Vimentin）呈強陽(yang)性(xing)表達。其高表達黑色素瘤相關(guan)抗原(yuan)（MAGE）和(he)小眼畸形相(xiang)關(guan)轉(zhuan)錄因(yin)子（MITF），MITF 表達水平(ping)約為(wei)正常(chang)黑(hei)素細胞的(de) 8 倍(bei)，驅(qu)動(dong)細胞內黑色素合成通(tong)路(lu)。A875 細胞還(hai)過(guo)表達絲裂(lie)原活化蛋白激(ji)酶(mei)（MAPK）通(tong)路(lu)中的(de)關(guan)鍵蛋白，BRAF V600E 突(tu)變(bian)率高(gao)達 90%，該(gai)突(tu)變(bian)使 BRAF 蛋(dan)白持續(xu)激(ji)活，下遊(you) MEK 和(he) ERK 磷(lin)酸化水平(ping)提(ti)升(sheng) 200%，推(tui)動細胞異常(chang)增殖(zhi)。實驗數(shu)據(ju)顯示(shi)，A875 細胞的(de)倍(bei)增時(shi)間僅為(wei) 24 小時，在軟瓊(qiong)脂(zhi)克(ke)隆(long)形成實驗中，單個細胞可形成平(ping)均(jun)直徑(jing) 1.2mm 的(de)克(ke)隆(long)，克(ke)隆(long)形成率達 45% 。在侵(qin)襲轉(zhuan)移能(neng)力方(fang)面(mian)，Transwell 實驗中，A875 細胞穿過(guo) Matrigel 基質膠的(de)數(shu)量(liang)是正常(chang)黑(hei)素細胞的(de) 12 倍(bei)；劃(hua)痕愈合實(shi)驗表明(ming)，其(qi)傷(shang)口閉(bi)合速(su)度(du)達 72μm/h。動(dong)物實(shi)驗證(zheng)實(shi)，皮下接種(zhong) 5×10⁵個 A875 細胞，10 - 14 天(tian)即(ji)可形成直徑(jing)超 8mm 的(de)實(shi)體(ti)瘤(liu)，且易發生肺(fei)轉(zhuan)移，肺(fei)部轉(zhuan)移竈檢出(chu)率(lv)高達(da) 75%。
A875 細胞的(de)培(pei)養(yang)需要精(jing)準(zhun)把(ba)控(kong)條(tiao)件(jian)。常(chang)用(yong)含 10% 胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)（FBS）、1% 雙(shuang)抗（青mei素(su) - 鏈(lian)mei素）的(de) RPMI 1640 培(pei)養(yang)基，FBS 提供(gong)的(de)胰島(dao)素(su)和(he)轉(zhuan)鐵蛋白可協同支持(chi)細胞生長。培(pei)養(yang)環境(jing)需維持在(zai) 37℃、5% CO₂的(de)恒溫(wen)培(pei)養(yang)箱中，當細胞融合度(du)達到(dao) 80% - 90% 時(shi)，按(an) 1:3 - 1:4 比(bi)例(li)傳(chuan)代，使(shi)用(yong) 0.25% 胰dan白酶(mei) - EDTA 消化細胞，傳代周(zhou)期約 3 天(tian)。新(xin)接(jie)種(zhong)細胞 2 - 4 小時開始貼壁(bi)，12 小時內基本完成貼壁(bi)過(guo)程。培(pei)養(yang)過(guo)程中，需每日(ri)在(zai)顯微鏡下(xia)觀察(cha)細胞形態，每(mei) 2 - 3 天(tian)更(geng)換壹次(ci)培(pei)養(yang)液，嚴(yan)格(ge)執行無(wu)菌操作，防止真菌、支原(yuan)體(ti)汙(wu)染，壹旦(dan)汙(wu)染，細胞生長速(su)度(du)將(jiang)下降 60% 以(yi)上，形(xing)態出(chu)現明(ming)顯異常(chang)。
在(zai)黑色素瘤研究領(ling)域，A875 細胞系(xi)成果豐碩。在(zai)機制研究方(fang)面(mian)，研究人員利(li)用該細胞系(xi)發(fa)現，微小 RNA - 211（miR - 211）通(tong)過(guo)靶向(xiang)調控雕(diao)亡相(xiang)關(guan)蛋白 Bim，抑制細胞雕(diao)亡，促進(jin) A875 細胞存(cun)活；長鏈(lian)非編碼 RNA LncRNA - MALAT1 可(ke)通(tong)過(guo)與 EZH2 結(jie)合，上調(tiao) SOX2 表達，增強(qiang)細胞的(de)幹(gan)性(xing)和(he)侵(qin)襲能(neng)力(li)。在(zai)藥物(wu)研發層面(mian)，A875 細胞系(xi)是評(ping)估 BRAF 抑制劑(ji)、MEK 抑制劑(ji)等(deng)靶向藥物(wu)的(de)核心(xin)模(mo)型。例(li)如，維莫非尼（Vemurafenib）在 A875 細胞中的(de) IC₅₀值(zhi)為(wei) 0.3μM，可(ke)顯著抑制細胞增殖(zhi)，誘導 30% 的(de)細胞發生雕(diao)亡；聯合使(shi)用(yong) MEK 抑制劑(ji)曲(qu)美替尼（Trametinib），能使(shi)細胞雕(diao)亡率(lv)提(ti)升(sheng)至 55%。在(zai)免(mian)yi治(zhi)療研究中，基於(yu) A875 細胞構(gou)建的(de)腫(zhong)瘤(liu)模型，成功(gong)驗證(zheng)了(le) PD - 1 抑制劑(ji)聯合 CTLA - 4 抑制劑(ji)的(de)協同抗(kang)腫(zhong)瘤(liu)效果，腫(zhong)瘤(liu)體積縮小率達 60%。不(bu)過(guo)，使用(yong) A875 細胞系(xi)時(shi)需註意(yi)，長(chang)期傳代可(ke)能(neng)導致(zhi)基因突(tu)變(bian)積累(lei)，實(shi)驗前需通(tong)過(guo)短串(chuan)聯重復序(xu)列（STR）分(fen)析、BRAF 基因突(tu)變(bian)檢測(ce)等手段(duan)進(jin)行(xing)嚴(yan)格(ge)鑒定，確(que)保(bao)細胞系(xi)的(de)遺(yi)傳(chuan)穩(wen)定性和(he)實(shi)驗數(shu)據(ju)可(ke)靠(kao)性。
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