WWX05-STC羊(yang)睪丸細(xi)胞(bao)系(xi)
WWX05-STC羊(yang)睪丸細(xi)胞(bao)系(xi)作(zuo)為(wei)針(zhen)對綿羊(yang)睪丸組織的綜(zong)合性(xing)細胞(bao)模型(xing)，在綿羊(yang)生殖(zhi)發(fa)育(yu)機(ji)制、精(jing)子發生(sheng)調控(kong)及(ji)生(sheng)殖(zhi)疾病(bing)研(yan)究領域具有重要價值。它(ta)的建(jian)立為深入(ru)探(tan)究(jiu)綿羊(yang)睪丸內(nei)多(duo)種(zhong)細胞(bao)的(de)協同作用(yong)、生精(jing)微環(huan)境(jing)動態平(ping)衡以(yi)及(ji)生(sheng)殖(zhi)系(xi)統(tong)疾病(bing)的(de)發(fa)生(sheng)機(ji)制等提(ti)供(gong)了(le)穩定(ding)的(de)體外(wai)研(yan)究平(ping)臺，對綿羊(yang)生殖(zhi)機(ji)能優(you)化(hua)和繁育(yu)效率提(ti)升意義(yi)重大(da)。
綿羊(yang)睪丸是(shi)雄(xiong)性(xing)生殖(zhi)系(xi)統(tong)的(de)核(he)心器官，由支持(chi)細胞(bao)、生(sheng)精(jing)細胞(bao)、間(jian)質(zhi)細(xi)胞(bao)等多(duo)種(zhong)細胞(bao)類(lei)型構成復(fu)雜(za)的生精(jing)微環(huan)境(jing)，這些(xie)細(xi)胞(bao)相(xiang)互(hu)作(zuo)用(yong)共(gong)同(tong)調控(kong)精(jing)子發生(sheng)全過程(cheng)。睪丸細(xi)胞(bao)的(de)正(zheng)常(chang)增殖(zhi)、分(fen)化(hua)及(ji)功(gong)能表達(da)直(zhi)接(jie)影響綿羊(yang)的繁(fan)殖(zhi)性(xing)能，而(er)傳統的(de)體(ti)內(nei)研(yan)究難(nan)以(yi)同時解析(xi)多(duo)種(zhong)細胞(bao)的(de)動態變化(hua)及(ji)互(hu)作(zuo)關(guan)系(xi)，原(yuan)代混合細胞(bao)培(pei)養又(you)存在成分不(bu)穩(wen)定、傳代能力(li)有限(xian)等問(wen)題(ti)。因(yin)此(ci)，建立(li) WWX05-STC 羊(yang)睪丸細(xi)胞(bao)系(xi)，成(cheng)為(wei)系(xi)統(tong)研(yan)究綿羊(yang)睪丸生(sheng)理(li)功能及(ji)病(bing)理(li)變化(hua)的(de)重要突(tu)破口。
WWX05-STC 羊(yang)睪丸細(xi)胞(bao)系(xi)的(de)建(jian)立(li)經過了(le)嚴(yan)謹(jin)規(gui)範的(de)操(cao)作流程。選(xuan)取(qu)健康(kang)的成(cheng)年(nian)綿羊(yang)，在無菌(jun)條件下取(qu)出睪(gao)丸組織，去除(chu)被膜(mo)、血(xue)管(guan)及(ji)結締(di)組織。將睪(gao)丸實(shi)質(zhi)剪(jian)切(qie)成(cheng) 1mm³ 左(zuo)右(you)的(de)小(xiao)塊，用含(han)雙(shuang)抗(kang)的(de)磷(lin)酸鹽緩沖(chong)液(ye)反復(fu)沖(chong)洗(xi)以(yi)清(qing)除(chu)血(xue)液(ye)和雜質(zhi)。加(jia)入(ru)細胞(bao)分(fen)散液(ye)，在 37℃條件下處(chu)理(li) 35-45 分鐘(zhong)，期間(jian)每隔(ge) 8 分鐘(zhong)輕輕吹(chui)打壹(yi)次使細胞(bao)充(chong)分分(fen)散。收集(ji)細(xi)胞(bao)懸液，經 70μm 細胞(bao)濾(lv)網過濾(lv)後，1200r/min 離心(xin) 8 分(fen)鐘(zhong)，棄上(shang)清(qing)，用(yong)含(han) 12% 胎牛血(xue)清(qing)的(de) DMEM/F12 培(pei)養液(ye)重懸細胞(bao)，接(jie)種(zhong)於培(pei)養瓶(ping)中，置於 37℃、5% CO₂恒(heng)溫(wen)培(pei)養箱(xiang)中進行原(yuan)代培(pei)養。培(pei)養初(chu)期，每(mei) 24-48 小(xiao)時更換(huan)壹(yi)次培(pei)養液(ye)，待細(xi)胞(bao)匯(hui)合度達 80% 時進行(xing)傳代，目(mu)前該(gai)細胞(bao)系(xi)已(yi)穩(wen)定(ding)傳代至(zhi) 45 代以(yi)上(shang)，細(xi)胞(bao)活(huo)力(li)保(bao)持(chi)在 85% 以(yi)上(shang)。
該(gai)細(xi)胞(bao)系(xi)呈現(xian)典(dian)型的上(shang)皮(pi)樣與成(cheng)纖(xian)維(wei)樣混合形態，兩種(zhong)細胞(bao)類(lei)型比(bi)例約為 2:3。上(shang)皮(pi)樣細胞(bao)呈多(duo)邊形或(huo)不(bu)規(gui)則(ze)圓(yuan)形(xing)，排列(lie)緊密，胞(bao)質(zhi)豐富，細(xi)胞(bao)核(he)呈圓(yuan)形(xing)；成纖(xian)維(wei)樣細胞(bao)呈長(chang)梭形，排(pai)列(lie)疏松(song)且有壹(yi)定(ding)方向(xiang)性(xing)，胞(bao)質(zhi)均(jun)勻，細胞(bao)核(he)呈橢(tuo)圓(yuan)形。兩種(zhong)細胞(bao)相(xiang)互(hu)交(jiao)織形成(cheng)立體(ti)生(sheng)長(chang)結構，具有較強(qiang)的(de)貼(tie)壁生(sheng)長(chang)能力(li)。生(sheng)長特(te)性(xing)研(yan)究顯(xian)示，WWX05-STC 細胞(bao)在 DMEM/F12 培(pei)養液(ye)中生長狀態最佳，相(xiang)較於其他(ta)培(pei)養液(ye)，細胞(bao)增殖(zhi)速(su)度提(ti)高約(yue) 20%；最(zui)適培(pei)養溫(wen)度為 37℃，與哺乳動物(wu)體(ti)溫(wen)壹(yi)致(zhi)；當(dang)胎牛血(xue)清(qing)濃(nong)度為 12% 時，細胞(bao)群體倍(bei)增時間(jian)最短(duan)，約(yue)為(wei) 65 小(xiao)時。傳代至(zhi) 35 代後(hou)，細胞(bao)形(xing)態比(bi)例和增殖(zhi)速(su)率無(wu)明(ming)顯(xian)變化(hua)，核(he)型分析(xi)表(biao)明(ming)其(qi)染(ran)色(se)體數(shu)目(mu)穩定(ding)（保持(chi)綿羊(yang)正(zheng)常(chang)的(de) 54 條(tiao)染(ran)色(se)體），遺(yi)傳背(bei)景(jing)可靠(kao)，仍保(bao)留睪丸組織多種(zhong)細胞(bao)的(de)協同功能特(te)性(xing)。
在功能特(te)性(xing)方面(mian)，WWX05-STC 羊(yang)睪丸細(xi)胞(bao)系(xi)展現出豐富的(de)生(sheng)殖(zhi)相(xiang)關(guan)功能。免疫(yi)熒光(guang)檢(jian)測發現(xian)，細胞(bao)同(tong)時表達(da)支(zhi)持(chi)細胞(bao)標誌物(wu)（波形(xing)蛋(dan)白、FSH 受(shou)體(ti)）、間(jian)質(zhi)細(xi)胞(bao)標誌物(wu)（睪酮合成酶(mei)、LH 受(shou)體(ti)）及(ji)生(sheng)精(jing)細胞(bao)早(zao)期標誌物(wu)（c-Kit），證實(shi)其混合細胞(bao)群屬(shu)性(xing)。該細(xi)胞(bao)系(xi)具(ju)有分(fen)泌(mi)睪酮和雄(xiong)激素結合蛋(dan)白（ABP）的能力(li)，ELISA 檢(jian)測顯(xian)示培(pei)養液(ye)中睪酮濃(nong)度可達 32ng/mL，ABP 濃(nong)度達 20ng/mL，能有效模擬(ni)體(ti)內(nei)生(sheng)精(jing)微環(huan)境(jing)的激素調節(jie)網絡。同時，WWX05-STC 細胞(bao)在體外(wai)培(pei)養條(tiao)件下可(ke)維(wei)持(chi)壹定(ding)的(de)精(jing)子發生(sheng)相(xiang)關(guan)基因(yin)表(biao)達，如(ru) Stra8、Sycp3 等，為(wei)研(yan)究精(jing)子發生(sheng)的分(fen)子調控(kong)機(ji)制提(ti)供(gong)了(le)理想(xiang)模型(xing)。此(ci)外(wai)，該(gai)細(xi)胞(bao)系(xi)對綿羊(yang)生殖(zhi)系(xi)統(tong)常(chang)見(jian)病(bing)原(yuan)體如(ru)衣原(yuan)體表(biao)現出敏感(gan)性(xing)，感(gan)染後(hou)會(hui)出現(xian)細(xi)胞(bao)形(xing)態異常(chang)和分泌(mi)功(gong)能紊亂，為研(yan)究病原(yuan)體致(zhi)生(sheng)殖(zhi)障(zhang)礙(ai)的(de)機(ji)制提(ti)供(gong)了(le)良好材(cai)料(liao)。
WWX05-STC 羊(yang)睪丸細(xi)胞(bao)系(xi)在多個研(yan)究領域應用(yong)廣泛(fan)。在生殖(zhi)生(sheng)理(li)研(yan)究中，通過對該細胞(bao)系(xi)進(jin)行(xing)共(gong)培(pei)養實(shi)驗，揭(jie)示了(le)支持(chi)細胞(bao)與(yu)間(jian)質(zhi)細(xi)胞(bao)在睪酮合成中的協同調控(kong)作(zuo)用(yong)；在繁育技(ji)術方(fang)面(mian)，利用該(gai)細(xi)胞(bao)系(xi)篩(shai)選(xuan)出促(cu)進生精(jing)細胞(bao)分(fen)化的(de)關(guan)鍵因(yin)子，為綿羊(yang)人工(gong)授精(jing)技(ji)術優(you)化(hua)提(ti)供(gong)了(le)理論依據；在獸醫臨床研(yan)究中，建立了(le)基於該細(xi)胞(bao)系(xi)的(de)藥(yao)物(wu)篩選(xuan)模型(xing)，已(yi)用於多種(zhong)治療睪丸炎(yan)藥(yao)物的(de)效力(li)評(ping)估(gu)。
作(zuo)為穩(wen)定(ding)可靠(kao)的綿羊(yang)睪丸混合細胞(bao)模型(xing)，WWX05-STC 不(bu)僅(jin)填bu了(le)綿羊(yang)睪丸多(duo)種(zhong)細胞(bao)協同研(yan)究的體(ti)外(wai)模型(xing)空(kong)白，更(geng)為綿羊(yang)生殖(zhi)生(sheng)物(wu)學(xue)及(ji)繁(fan)育(yu)技(ji)術研(yan)究提(ti)供(gong)了(le)重要工(gong)具，推動了(le)綿羊(yang)生殖(zhi)機(ji)能調控(kong)和優(you)良(liang)品種(zhong)培(pei)育技(ji)術的(de)發(fa)展，對提(ti)升綿羊(yang)養殖(zhi)產業(ye)的經濟(ji)效益(yi)具有重要意義(yi)。
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