SFSFS羊胎兒(er)皮膚(fu)成纖維(wei)細(xi)胞系
SFSFS羊胎兒(er)皮膚(fu)成纖維(wei)細(xi)胞系作為針(zhen)對羊(yang)胎兒(er)皮膚(fu)組織(zhi)的(de)特異(yi)性(xing)細(xi)胞模型(xing)，在(zai)綿羊(yang)胚(pei)胎發(fa)育機(ji)制(zhi)、皮膚(fu)組織(zhi)修(xiu)復(fu)及轉(zhuan)基因(yin)技(ji)術研(yan)究領域具有(you)重(zhong)要(yao)價(jia)值(zhi)。它的(de)建立為(wei)深入探究(jiu)羊胎兒(er)皮膚(fu)成纖維(wei)細(xi)胞的分化規律、皮膚(fu)組織(zhi)結(jie)構形成(cheng)以及(ji)胚(pei)胎期(qi)皮膚(fu)發(fa)育異(yi)常(chang)的(de)發(fa)生路(lu)徑(jing)等提供(gong)了穩(wen)定的體外研(yan)究平臺，對綿(mian)羊(yang)育種(zhong)改(gai)良(liang)和皮膚(fu)生物工程(cheng)研(yan)究意義重(zhong)大(da)。
羊胎兒(er)皮膚(fu)發(fa)育是(shi)胚(pei)胎發(fa)育過程中(zhong)的重(zhong)要(yao)環節，皮膚(fu)不僅(jin)是(shi)機體的(de)保(bao)護屏(ping)障(zhang)，其(qi)發(fa)育狀(zhuang)況(kuang)還直(zhi)接(jie)反(fan)映胚(pei)胎的(de)整體生長(chang)態(tai)勢。胎兒(er)期是(shi)皮膚(fu)結構和功(gong)能(neng)形(xing)成的(de)關鍵階段，成纖維(wei)細(xi)胞作為皮膚(fu)真皮層的(de)主要細(xi)胞成分，在(zai)膠原(yuan)蛋(dan)白合(he)成、皮膚(fu)彈(dan)性維持(chi)以及(ji)創(chuang)傷修(xiu)復(fu)中發(fa)揮核(he)心作用。傳(chuan)統(tong)的整體胚(pei)胎研(yan)究難(nan)以細(xi)致觀(guan)察皮膚(fu)成纖維(wei)細(xi)胞的動態(tai)變(bian)化和分(fen)子(zi)調(tiao)控機(ji)制，而原(yuan)代(dai)胎兒(er)皮膚(fu)細(xi)胞培(pei)養存在(zai)傳(chuan)代(dai)受限、穩(wen)定性不足(zu)等問題。因(yin)此(ci)，建立 SFSFS 羊(yang)胎兒(er)皮膚(fu)成纖維(wei)細(xi)胞系，成為解(jie)析(xi)綿羊(yang)胚(pei)胎皮膚(fu)發(fa)育奧秘、推(tui)動皮膚(fu)相(xiang)關(guan)研(yan)究(jiu)的(de)重(zhong)要(yao)突破口。
SFSFS 羊胎兒(er)皮膚(fu)成纖維(wei)細(xi)胞系的建立經(jing)過了嚴(yan)謹規範(fan)的(de)操作(zuo)流(liu)程(cheng)。選(xuan)取(qu)妊娠 45-50 天(tian)的健(jian)康綿羊(yang)胎兒(er)，在(zai)無菌條件下取出背部皮膚(fu)組織(zhi)，去(qu)除皮下脂(zhi)肪(fang)和結(jie)締(di)組織(zhi)。將(jiang)皮膚(fu)組zhi剪(jian)切(qie)成 1mm³ 左右(you)的小塊，用(yong)含雙(shuang)抗的磷(lin)酸鹽(yan)緩(huan)沖液(ye)反(fan)復(fu)沖洗(xi)，以清(qing)除血液(ye)和雜(za)質(zhi)。加(jia)入細(xi)胞分散(san)液(ye)，在(zai) 37℃條件下處理(li) 30-35 分(fen)鐘，期間(jian)每隔(ge) 5 分鐘輕輕吹打壹(yi)次使(shi)細(xi)胞分散(san)。收(shou)集細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，經(jing) 70μm 細(xi)胞濾(lv)網過濾(lv)後(hou)，1000r/min 離(li)心 5 分(fen)鐘，棄上(shang)清(qing)，用(yong)含 10% 胎牛(niu)血清(qing)的(de) DMEM 培(pei)養液(ye)重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，接種(zhong)於(yu)培(pei)養瓶(ping)中，置(zhi)於(yu) 37℃、5% CO₂恒(heng)溫(wen)培(pei)養箱中進行(xing)原(yuan)代(dai)培(pei)養。培(pei)養初期(qi)，每 24 小(xiao)時更(geng)換(huan)壹(yi)次培(pei)養液(ye)，待細(xi)胞匯(hui)合(he)度達(da) 80% 時(shi)進行(xing)傳(chuan)代(dai)，目前(qian)該細(xi)胞系已穩(wen)定傳(chuan)代(dai)至 50 代以上(shang)，細(xi)胞活力保(bao)持在(zai) 85% 以上(shang)。
該(gai)細(xi)胞系呈現典型(xing)的長(chang)梭形(xing)形(xing)態(tai)，細(xi)胞排(pai)列(lie)整齊，呈平行或漩渦(wo)狀(zhuang)生長(chang)，胞質豐(feng)富(fu)且(qie)均(jun)勻(yun)，細(xi)胞核(he)呈橢圓(yuan)形，位(wei)於細(xi)胞中央，具有(you)較(jiao)強(qiang)的貼壁(bi)生長(chang)能(neng)力。生長(chang)特(te)性研(yan)究顯示(shi)，SFSFS 細(xi)胞在(zai) DMEM 培(pei)養液(ye)中生長(chang)狀(zhuang)態(tai)最(zui)佳(jia)，相(xiang)較(jiao)於其(qi)他(ta)培(pei)養液(ye)，細(xi)胞增殖速(su)度提高約(yue) 15%；最(zui)適(shi)培(pei)養溫(wen)度(du)為 37℃，與(yu)哺乳(ru)動物體溫(wen)相(xiang)符；當(dang)胎牛(niu)血清(qing)濃度為 10% 時，細(xi)胞群體倍增時間(jian)最(zui)短，約(yue)為(wei) 48 小時(shi)。傳(chuan)代(dai)至 40 代後(hou)，細(xi)胞形態(tai)和增(zeng)殖速(su)率無明顯變(bian)化，核(he)型(xing)分析(xi)表(biao)明其(qi)染(ran)色(se)體數(shu)目穩(wen)定（保(bao)持綿(mian)羊正(zheng)常(chang)的 54 條染(ran)色(se)體），遺(yi)傳(chuan)背景可(ke)靠(kao)，仍(reng)保(bao)留胎兒(er)皮膚(fu)成纖維(wei)細(xi)胞的特性。
在(zai)功能(neng)特性(xing)方面(mian)，SFSFS 羊胎兒(er)皮膚(fu)成纖維(wei)細(xi)胞系展(zhan)現(xian)出豐(feng)富(fu)的(de)皮膚(fu)細(xi)胞功能。免疫熒(ying)光(guang)檢測(ce)發(fa)現，細(xi)胞高表(biao)達成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞特異性標誌物如(ru)波形(xing)蛋(dan)白、Ⅰ 型(xing)膠原(yuan)蛋(dan)白，證實其(qi)皮膚(fu)成纖維(wei)細(xi)胞屬性。該(gai)細(xi)胞系具有(you)較(jiao)強(qiang)的膠原(yuan)蛋(dan)白合(he)成能(neng)力，ELISA 檢測(ce)顯示(shi)培(pei)養液(ye)中 Ⅰ 型(xing)膠原(yuan)蛋(dan)白濃度可(ke)達(da) 45ng/mL，這對研(yan)究(jiu)皮膚(fu)組織(zhi)的(de)形成(cheng)和修(xiu)復(fu)機制(zhi)具有(you)重(zhong)要(yao)意義。同時，SFSFS 細(xi)胞在(zai)受到(dao)機(ji)械(xie)損(sun)傷或炎癥刺(ci)激(ji)時(shi)，會表(biao)現出成纖維(wei)細(xi)胞te有(you)的應激(ji)反(fan)應，如遷移(yi)能(neng)力增(zeng)強(qiang)、細(xi)胞外基(ji)質分泌(mi)增加(jia)等，為研究皮膚(fu)創(chuang)傷修(xiu)復(fu)的病(bing)理(li)機(ji)制(zhi)提供(gong)了理(li)想模型(xing)。此外，該(gai)細(xi)胞系對綿(mian)羊(yang)常見(jian)的皮膚(fu)病原(yuan)體如(ru)葡萄球菌表(biao)現出壹(yi)定的(de)敏感(gan)性(xing)，感(gan)染(ran)後(hou)會影響(xiang)細(xi)胞的增殖和膠原(yuan)蛋(dan)白合(he)成功(gong)能(neng)，為(wei)研(yan)究(jiu)病(bing)原(yuan)體與(yu)皮膚(fu)細(xi)胞的相(xiang)互作用(yong)提供(gong)了良(liang)好(hao)材料(liao)。
SFSFS 羊(yang)胎兒(er)皮膚(fu)成纖維(wei)細(xi)胞系在(zai)多(duo)個研究領域應用廣泛。在(zai)胚(pei)胎發(fa)育研(yan)究(jiu)中(zhong)，通過對該(gai)細(xi)胞系進行(xing)基因(yin)沈(chen)默實(shi)驗，揭(jie)示(shi)了 TGF-β 基(ji)因(yin)在(zai)皮膚(fu)成纖維(wei)細(xi)胞分化中的(de)關(guan)鍵調控作(zuo)用；在(zai)轉(zhuan)基因(yin)研(yan)究方(fang)面(mian)，利(li)用該(gai)細(xi)胞系作為核(he)供(gong)體成(cheng)功構建了轉(zhuan)基因(yin)綿(mian)羊模型(xing)，為綿(mian)羊的(de)遺(yi)傳(chuan)改(gai)良(liang)提供(gong)了新(xin)的(de)途(tu)徑；在(zai)皮膚(fu)修(xiu)復(fu)研究(jiu)中(zhong)，建立了基(ji)於(yu)該細(xi)胞系的皮膚(fu)損(sun)傷模型(xing)，用於(yu)探究(jiu)胎兒(er)皮膚(fu)快速(su)修(xiu)復(fu)的分(fen)子(zi)機(ji)制。
作為(wei)穩(wen)定可(ke)靠(kao)的羊胎兒(er)皮膚(fu)成纖維(wei)細(xi)胞模型(xing)，SFSFS 不僅(jin)填bu了綿(mian)羊(yang)胎兒(er)皮膚(fu)成纖維(wei)細(xi)胞長期體外培(pei)養的(de)空(kong)白，更(geng)為(wei)綿(mian)羊(yang)胚(pei)胎發(fa)育生物學(xue)和皮膚(fu)生物工程(cheng)研(yan)究提供(gong)了重(zhong)要(yao)工具，推(tui)動了綿(mian)羊(yang)皮膚(fu)相(xiang)關(guan)疾(ji)病(bing)防(fang)控技(ji)術和轉(zhuan)基因(yin)育(yu)種(zhong)技(ji)術的發(fa)展(zhan)，對提升綿羊養殖產(chan)業的健(jian)康水(shui)平和經(jing)濟效益具有(you)重(zhong)要(yao)意義。
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