LMH雞肝(gan)癌懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)系
LMH雞(ji)肝(gan)癌懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)系作(zuo)為針對(dui)禽類(lei)肝(gan)臟惡(e)性(xing)腫瘤(liu)的(de)特異性(xing)細胞(bao)模(mo)型(xing)，在(zai)禽類(lei)肝(gan)癌發生機(ji)制(zhi)、抗(kang)腫(zhong)瘤(liu)藥(yao)物(wu)篩(shai)選(xuan)及(ji)病(bing)毒(du)感染(ran)研究(jiu)領(ling)域(yu)具有重(zhong)要價(jia)值(zhi)。它(ta)的(de)建立為深入探究(jiu)雞肝(gan)癌細胞(bao)的增(zeng)殖規律(lv)、代(dai)謝特征以及腫(zhong)瘤(liu)微(wei)環境的交互作(zuo)用等提(ti)供(gong)了(le)穩定的(de)體(ti)外研究(jiu)平(ping)臺，對(dui)禽類(lei)養(yang)殖業(ye)的疾病防控和腫(zhong)瘤(liu)生物(wu)學(xue)研(yan)究(jiu)意義(yi)重大(da)。
雞肝(gan)癌是(shi)禽類(lei)養(yang)殖中常(chang)見(jian)的惡(e)性(xing)腫瘤(liu)之(zhi)壹(yi)，其(qi)發病率雖不(bu)及(ji)哺乳動(dong)物(wu)，但(dan)壹(yi)旦(dan)發生便會(hui)導致(zhi)雞群生長(chang)停(ting)滯、產蛋量(liang)驟(zhou)降，給(gei)養(yang)殖產業(ye)帶來顯(xian)著損失。肝(gan)癌細胞(bao)的無限增(zeng)殖、侵(qin)襲轉移(yi)等特性(xing)是疾病惡(e)化的關(guan)鍵，而傳統(tong)的(de)體(ti)內研(yan)究(jiu)受倫(lun)理(li)限(xian)制和操(cao)作(zuo)復雜性(xing)影響，難以(yi)精準解(jie)析腫瘤(liu)發生的(de)分(fen)子機(ji)制(zhi)。因此(ci)，建立(li) LMH 雞(ji)肝(gan)癌懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)系，成(cheng)為揭(jie)示禽類(lei)肝(gan)癌病(bing)理(li)過程(cheng)、開發有效防治技術(shu)的重要突(tu)破口。
LMH 雞肝(gan)癌懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)系的(de)建立(li)經過了(le)嚴謹規範的(de)操(cao)作(zuo)流程(cheng)。選取(qu)自(zi)然發病的肝(gan)癌雞(ji)肝(gan)臟腫(zhong)瘤(liu)組織(zhi)，在超凈工(gong)作(zuo)臺中去除(chu)壞(huai)死(si)組織(zhi)和正(zheng)常(chang)肝(gan)實質(zhi)，用含(han)雙(shuang)抗(kang)（氨基(ji)糖苷(gan)類(lei)與 β- 內酰(xian)胺類(lei)抗(kang)生素(su)）的(de)磷酸(suan)鹽緩沖(chong)液(ye)反復沖(chong)洗，以(yi)清(qing)除汙染(ran)物(wu)。將腫瘤(liu)組zhi剪(jian)碎(sui)成 1mm³ 左(zuo)右的(de)小塊，加(jia)入含(han)膠原酶(mei)和胰(yi)dan白酶的(de)細胞(bao)分散(san)液(ye)，在 37℃條件下振蕩(dang)處理(li) 60 分鐘，使細胞(bao)充分(fen)分散(san)。收集細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，經 70μm 細胞(bao)濾網過(guo)濾後(hou)，1200r/min 離(li)心(xin) 8 分鐘，棄上(shang)清(qing)，用含(han) 15% 胎(tai)牛(niu)血清(qing)的 RPMI-1640 培養液(ye)重懸(xuan)細胞(bao)，接種於(yu)無菌搖瓶(ping)中(zhong)，置於(yu) 37℃、5% CO₂恒(heng)溫(wen)培(pei)養(yang)箱(xiang)中進(jin)行(xing)懸(xuan)浮(fu)培養(yang)。培養(yang)初期，每日觀察(cha)細胞(bao)聚集狀態，每 24 小時更換壹半(ban)培養(yang)液(ye)，待細胞(bao)密(mi)度(du)達到(dao) 1×10⁶個(ge) /mL 時(shi)進(jin)行(xing)傳代(dai)，目(mu)前該(gai)細胞(bao)系已(yi)穩定傳代(dai)至(zhi) 60 代(dai)以上(shang)，細胞(bao)活力(li)保(bao)持(chi)在 90% 以(yi)上(shang)。
該細胞(bao)系呈(cheng)現典(dian)型(xing)的(de)懸(xuan)浮(fu)生長(chang)特性(xing)，細胞(bao)呈圓(yuan)形或橢(tuo)圓(yuan)形，大(da)小均壹(yi)，胞(bao)質飽(bao)滿，細胞(bao)核(he)大(da)而明(ming)顯(xian)，多數細胞(bao)單(dan)獨(du)懸(xuan)浮(fu)或形成(cheng)松(song)散(san)的(de)小細胞(bao)團(tuan)。生長(chang)特性(xing)研究(jiu)顯(xian)示，LMH 細胞(bao)在 RPMI-1640 培(pei)養液(ye)中生長(chang)狀(zhuang)態最(zui)佳(jia)，相(xiang)較(jiao)於(yu) DMEM 培(pei)養(yang)液(ye)，細胞(bao)增(zeng)殖速(su)度(du)提(ti)高(gao)約(yue) 25%；最(zui)適(shi)培(pei)養(yang)溫(wen)度(du)為(wei) 37℃，與禽類(lei)體(ti)溫(wen)相(xiang)符；當胎(tai)牛(niu)血清(qing)濃度(du)為(wei) 15% 時，細胞(bao)群體倍(bei)增(zeng)時間最(zui)短(duan)，約(yue)為 36 小時。傳代(dai)至(zhi) 50 代(dai)後(hou)，細胞(bao)形態和增(zeng)殖速(su)率無明顯(xian)變化(hua)，核(he)型(xing)分(fen)析(xi)表明(ming)其(qi)染(ran)色(se)體(ti)數目(mu)雖存在(zai)異(yi)常(chang)（呈現亞二(er)倍(bei)體(ti)特征），但(dan)遺(yi)傳背景穩定，符合腫(zhong)瘤(liu)細胞(bao)系的(de)典型(xing)特征。
在功(gong)能特性(xing)方(fang)面，LMH 雞肝(gan)癌懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)系展(zhan)現出(chu)豐(feng)富(fu)的(de)腫瘤(liu)細胞(bao)功(gong)能。流式細胞(bao)術(shu)檢測發現，細胞(bao)高(gao)表達肝(gan)癌相(xiang)關(guan)標誌(zhi)物(wu)如(ru)甲(jia)胎(tai)蛋白（AFP）、細胞(bao)角(jiao)蛋白 19（CK19），進(jin)壹(yi)步(bu)證實其(qi)肝(gan)癌細胞(bao)屬性(xing)。該細胞(bao)系具(ju)有較(jiao)強(qiang)的(de)增(zeng)殖能力(li)和克(ke)隆形成(cheng)能力(li)，軟瓊脂克(ke)隆實驗(yan)顯(xian)示其(qi)克(ke)隆形成(cheng)率達 45%，顯(xian)著高(gao)於(yu)正(zheng)常(chang)肝(gan)細胞(bao)；同(tong)時(shi)，細胞(bao)分泌多種血管(guan)內皮(pi)生長(chang)因(yin)子（VEGF），模(mo)擬(ni)腫瘤(liu)組織(zhi)的血管(guan)生成(cheng)過(guo)程(cheng)，這對(dui)研(yan)究(jiu)肝(gan)癌的(de)侵(qin)襲轉移(yi)機(ji)制(zhi)具有(you)重要(yao)意義(yi)。此(ci)外，LMH 細胞(bao)對(dui)禽類(lei)常(chang)見(jian)的肝(gan)炎病(bing)毒(du)（如雞戊(wu)型(xing)肝(gan)炎病(bing)毒(du)）表現(xian)出易(yi)感(gan)性(xing)，感染(ran)後(hou)病(bing)毒(du)復(fu)制(zhi)效(xiao)率高(gao)，為(wei)研(yan)究(jiu)病毒(du)與肝(gan)癌發生的(de)關(guan)聯(lian)提(ti)供(gong)了(le)理(li)想模(mo)型(xing)。
LMH 雞(ji)肝(gan)癌懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)系在(zai)多個(ge)研(yan)究(jiu)領(ling)域(yu)應用廣(guang)泛。在(zai)腫瘤(liu)機(ji)制(zhi)研究(jiu)中，通(tong)過(guo)轉錄組測(ce)序鑒定(ding)出(chu) 12 個(ge)禽類(lei)肝(gan)癌特異性(xing)高(gao)表達基(ji)因(yin)，其(qi)中 LOC420056 基(ji)因的(de)敲(qiao)除可(ke)使細胞(bao)增(zeng)殖速(su)率降低(di) 50%；在藥(yao)物(wu)篩(shai)選(xuan)方(fang)面，利用該細胞(bao)系建(jian)立了(le)高(gao)通(tong)量(liang)篩(shai)選(xuan)模(mo)型(xing)，已(yi)篩(shai)選(xuan)出(chu) 3 種對(dui)雞(ji)肝(gan)癌細胞(bao)抑(yi)制(zhi)率超過 80% 的(de)天(tian)然化(hua)合物(wu)；在(zai)病毒學(xue)研(yan)究(jiu)中，通(tong)過(guo)細胞(bao)感染(ran)實驗(yan)揭(jie)示了(le)肝(gan)炎病(bing)毒(du)蛋白與宿主(zhu)癌基(ji)因(yin)的(de)相(xiang)互作(zuo)用機(ji)制(zhi)。
作(zuo)為穩定可(ke)靠(kao)的禽類(lei)肝(gan)癌懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)模(mo)型(xing)，LMH 不(bu)僅填bu了禽類(lei)腫(zhong)瘤(liu)細胞(bao)體外(wai)研究(jiu)的空白，更為比較(jiao)腫瘤(liu)學(xue)和禽類(lei)疾病防控提(ti)供(gong)了(le)重(zhong)要工(gong)具(ju)，推動(dong)了禽類(lei)肝(gan)癌防(fang)治(zhi)技術(shu)的研發，對(dui)保(bao)障禽類(lei)養(yang)殖產業(ye)的健(jian)康發展(zhan)具有(you)重要意義(yi)。
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