GGA-E家雞胚胎(tai)細胞系(xi)
GGA-E家雞胚胎(tai)細胞系(xi)作(zuo)為針(zhen)對家雞胚胎(tai)組織的特異(yi)性細胞模(mo)型，在禽(qin)類(lei)胚胎(tai)發育機制(zhi)、基因(yin)功(gong)能驗(yan)證(zheng)及(ji)病(bing)毒增殖(zhi)研究(jiu)領(ling)域具有(you)重(zhong)要價(jia)值。它(ta)的建立為深入(ru)探(tan)究(jiu)家雞胚胎(tai)細胞的分化(hua)規律(lv)、組織(zhi)器官(guan)形(xing)成(cheng)機制(zhi)以(yi)及胚胎(tai)期病原體感染(ran)路徑(jing)等(deng)提供(gong)了穩定的體外(wai)研(yan)究(jiu)平(ping)臺，對禽(qin)類(lei)育(yu)種(zhong)改良(liang)和胚胎(tai)生物(wu)學研究(jiu)意(yi)義(yi)重大。
家雞作(zuo)為重要(yao)的模(mo)式生物(wu)和農業(ye)養(yang)殖(zhi)物(wu)種，其(qi)胚胎(tai)發育過程(cheng)具有(you)高度(du)的研究(jiu)價(jia)值。胚胎(tai)期是器官(guan)形(xing)成(cheng)和性狀決(jue)定的關(guan)鍵(jian)階段(duan)，許(xu)多遺(yi)傳疾(ji)病和發育(yu)異(yi)常(chang)都起(qi)源於(yu)這(zhe)壹(yi)時(shi)期(qi)。傳統(tong)的胚胎(tai)整體研究(jiu)難(nan)以(yi)精準(zhun)定位(wei)細胞層面的調(tiao)控(kong)機制(zhi)，而(er)原代胚胎(tai)細胞存(cun)在傳代(dai)次(ci)數(shu)有(you)限(xian)、穩定性不足等問題。因此(ci)，建立 GGA-E 家雞胚胎(tai)細胞系(xi)，成為解析禽(qin)類(lei)胚胎(tai)發育奧(ao)秘、推(tui)動(dong)禽(qin)類(lei)育(yu)種(zhong)技術(shu)發展(zhan)的重要(yao)突破口(kou)。
GGA-E 家雞胚胎(tai)細胞系(xi)的建立經過(guo)了嚴(yan)謹(jin)規範(fan)的操作(zuo)流(liu)程(cheng)。選(xuan)取(qu)孵化(hua)至(zhi) 9-11 日齡的健(jian)康(kang)雞(ji)胚，在超凈(jing)工作(zuo)臺(tai)中(zhong)無(wu)菌(jun)剝離(li)胚胎(tai)軀幹組織，去除(chu)頭(tou)部、內(nei)臟和骨骼(ge)結構(gou)。將(jiang)胚胎(tai)組zhi剪碎成 1mm³ 左右的小塊(kuai)，用含雙(shuang)抗(kang)（青mei素與(yu)鏈mei素）的磷(lin)酸鹽緩沖(chong)液反復沖(chong)洗，以(yi)清除(chu)紅(hong)細胞和雜質(zhi)。加(jia)入(ru) 0.25% 胰dan白酶溶液，在 37℃條(tiao)件下(xia)消(xiao)化(hua) 20-25 分鐘(zhong)，期間輕輕振蕩(dang)使(shi)細胞分散。收集細胞懸(xuan)液，經 70μm 細胞濾(lv)網(wang)過濾(lv)後，1000r/min 離(li)心 5 分(fen)鐘(zhong)，棄上(shang)清(qing)，用含 10% 胎(tai)牛(niu)血清(qing)的 DMEM 高糖(tang)培養(yang)液重懸(xuan)細胞，接種於(yu)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu) 37℃、5% CO₂恒(heng)溫培養(yang)箱中進(jin)行(xing)原代培養(yang)。培養(yang)初期(qi)，每 2-3 天更(geng)換壹次(ci)培養(yang)液，待(dai)細胞匯(hui)合度(du)達 80% 時進(jin)行(xing)傳代(dai)，目前(qian)該(gai)細胞系(xi)已穩定傳代(dai)至(zhi) 50 代以(yi)上(shang)，細胞活力保持在 85% 以(yi)上(shang)。
該(gai)細胞系(xi)呈現典型的成纖(xian)維樣形(xing)態，細胞呈長(chang)梭(suo)形(xing)或(huo)星(xing)形(xing)，排列疏松(song)且(qie)有(you)壹(yi)定方向(xiang)性，胞質(zhi)均勻，細胞核呈橢(tuo)圓形(xing)，具有(you)較(jiao)強的貼壁生長(chang)能力(li)。生長(chang)特性研究(jiu)顯(xian)示(shi)，GGA-E 細胞在 DMEM 高糖(tang)培養(yang)液中生(sheng)長(chang)狀態最佳(jia)，相(xiang)較於(yu) MEM 培養(yang)液，細胞增殖(zhi)速度(du)提高約 20%；最(zui)適培養(yang)溫度(du)為 37℃，與雞(ji)胚發(fa)育的生理溫度(du)相符(fu)；當胎(tai)牛(niu)血(xue)清濃(nong)度(du)為 10% 時，細胞群體倍增時間最短，約為 48 小時(shi)。傳代(dai)至(zhi) 40 代後，細胞形(xing)態和增殖(zhi)速率(lv)無明(ming)顯(xian)變(bian)化(hua)，核型分析表明(ming)其(qi)染(ran)色體數(shu)目穩(wen)定（保持家雞正常(chang)的 78 條(tiao)染(ran)色體），遺傳背(bei)景可靠，仍保留胚胎(tai)細胞的多向(xiang)分化(hua)潛能(neng)。
在功(gong)能特性方面，GGA-E 家雞胚胎(tai)細胞系(xi)展現出豐富(fu)的胚胎(tai)細胞功(gong)能。免疫(yi)熒(ying)光檢(jian)測(ce)發現，細胞高表達胚胎(tai)幹細胞標(biao)誌(zhi)物(wu)如階段(duan)特異(yi)性胚胎(tai)抗(kang)原 - 1（SSEA-1）和堿性磷(lin)酸酶（AKP），證(zheng)實其(qi)胚胎(tai)源性特征(zheng)。該(gai)細胞系(xi)在特定誘(you)導條(tiao)件下(xia)可向多種細胞類型分化(hua)，如在成骨(gu)誘(you)導液中培養(yang)能形(xing)成(cheng)鈣(gai)結節，在脂肪(fang)誘(you)導液中可出現脂滴(di)積(ji)累(lei)，這(zhe)對研究(jiu)胚胎(tai)細胞的分化(hua)潛能(neng)和調(tiao)控(kong)機制(zhi)具有(you)重(zhong)要意義。同時(shi)，GGA-E 細胞對禽(qin)類(lei)常(chang)見(jian)的胚胎(tai)期病毒（如禽(qin)liu感(gan)病(bing)毒(du)、新(xin)城疫病毒(du)）表現出高度(du)敏感性，病毒在細胞內(nei)復制效(xiao)率(lv)高，可產(chan)生(sheng)明(ming)顯(xian)的細胞病變效(xiao)應，為研究(jiu)病(bing)毒(du)與胚胎(tai)細胞的相互(hu)作(zuo)用提供(gong)了理想(xiang)模(mo)型。
GGA-E 家雞胚胎(tai)細胞系(xi)在多個(ge)研(yan)究(jiu)領(ling)域應用廣(guang)泛(fan)。在發育(yu)生(sheng)物(wu)學研究(jiu)中(zhong)，通(tong)過 CRISPR-Cas9 技術(shu)對該(gai)細胞系(xi)進(jin)行(xing)基因(yin)編輯，揭示(shi)了 HOX 家族(zu)基因(yin)在肢體發育(yu)中的調(tiao)控(kong)作(zuo)用；在育種(zhong)研(yan)究(jiu)中(zhong)，利(li)用該(gai)細胞系(xi)篩選(xuan)與生長(chang)性狀相關(guan)的分子標(biao)記(ji)，為家雞早(zao)期選(xuan)種提供(gong)了新(xin)的依(yi)據；在病毒(du)學研究(jiu)中(zhong)，建立了基於(yu)細胞病變的病毒(du)滴度(du)測(ce)定方法(fa)，已用於(yu)多(duo)種(zhong)禽(qin)類(lei)疫(yi)苗(miao)的效(xiao)力評(ping)估(gu)。
作(zuo)為穩定可靠的家雞胚胎(tai)細胞模(mo)型，GGA-E 不僅填(tian)bu了禽(qin)類(lei)胚胎(tai)細胞長(chang)期體外(wai)培養(yang)的空白，更(geng)為禽(qin)類(lei)發(fa)育(yu)生物(wu)學和遺傳育(yu)種研(yan)究(jiu)提供(gong)了重要工具，推(tui)動(dong)了家雞胚胎(tai)期疾病防控和優良(liang)品(pin)種(zhong)培育技術(shu)的發展(zhan)，對提升(sheng)禽(qin)類(lei)養(yang)殖(zhi)產(chan)業(ye)的科(ke)技水(shui)平(ping)和經濟效(xiao)益具有(you)重(zhong)要意義。
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