CiSK草(cao)魚(yu)皮膚(fu)組織細(xi)胞系(xi)
CiSK草(cao)魚(yu)皮膚(fu)組織細(xi)胞系(xi)作(zuo)為聚焦(jiao)草(cao)魚(yu)皮膚(fu)組織的特異性細(xi)胞模(mo)型,在淡(dan)水魚(yu)類(lei)皮膚(fu)生(sheng)理(li)、免(mian)疫(yi)機制及(ji)相關(guan)疾(ji)病研究領域意義(yi)重(zhong)大(da)。它的建立為深入(ru)探索(suo)草(cao)魚(yu)皮膚(fu)的結構功(gong)能、損傷修復(fu)過(guo)程(cheng)以(yi)及(ji)病原體入侵機(ji)制等提供了(le)穩(wen)定(ding)的體外研究平臺(tai),對(dui)草(cao)魚(yu)養(yang)殖(zhi)產(chan)業的健康(kang)發(fa)展助(zhu)力顯著。
草(cao)魚(yu)作(zuo)為我國(guo)重(zhong)要的淡(dan)水養殖(zhi)魚(yu)類(lei),皮膚(fu)是(shi)其與外(wai)界環(huan)境直(zhi)接(jie)接(jie)觸的第壹道(dao)屏(ping)障(zhang),具(ju)有(you)保護機體、防止水分流(liu)失(shi)、抵禦(yu)病原體侵襲(xi)等多(duo)種(zhong)重(zhong)要功能。皮膚(fu)的健康(kang)狀(zhuang)況(kuang)直接(jie)影響(xiang)草(cao)魚(yu)的生長(chang)發(fa)育和(he)存(cun)活(huo)能力。在養(yang)殖(zhi)過(guo)程(cheng)中,草(cao)魚(yu)皮膚(fu)易(yi)受機(ji)械損傷、病原菌(jun)感(gan)染、水質汙染等因(yin)素影響(xiang),引發(fa)爛鰓病、赤(chi)皮病等疾(ji)病,給養殖(zhi)帶(dai)來巨大損失。因(yin)此,建立 CiSK 草(cao)魚(yu)皮膚(fu)組織細(xi)胞系(xi),對(dui)於揭(jie)示(shi)草(cao)魚(yu)皮膚(fu)的生理(li)機制(zhi)、研發(fa)皮膚(fu)疾(ji)病防控(kong)技(ji)術(shu)具(ju)有(you)重要的理(li)論(lun)和(he)實踐價(jia)值。
CiSK 草(cao)魚(yu)皮膚(fu)組織細(xi)胞系(xi)的建立經(jing)過(guo)了嚴(yan)謹規(gui)範(fan)的操作(zuo)。選(xuan)取(qu)健(jian)康(kang)的草(cao)魚(yu),經(jing)嚴(yan)格(ge)無(wu)菌(jun)處(chu)理(li)後(hou),在超(chao)凈(jing)工作(zuo)臺(tai)中(zhong)小心剝取(qu)背(bei)部皮膚(fu)組織,去除皮下脂(zhi)肪(fang)和(he)肌肉組織。將(jiang)皮膚(fu)組zhi剪(jian)碎成(cheng) 1mm³ 左右(you)的小塊(kuai),用(yong)含(han)雙(shuang)抗(kang)的磷(lin)酸鹽緩(huan)沖(chong)液(ye)反(fan)復(fu)沖(chong)洗(xi),以(yi)清(qing)除雜(za)質和血細(xi)胞。隨(sui)後(hou)加入(ru) 0.25% 胰dan白(bai)酶(mei)溶液,在 25℃條件(jian)下消(xiao)化(hua) 20-30 分(fen)鐘,使細(xi)胞分(fen)散。收集細(xi)胞懸(xuan)液,經(jing) 70μm 細(xi)胞濾(lv)網過(guo)濾後(hou),1000r/min 離心 5 分鐘(zhong),棄(qi)上(shang)清(qing),用(yong)含(han) 10% 胎牛(niu)血清(qing)的 L-15 培(pei)養(yang)液重懸細(xi)胞,接(jie)種(zhong)於培(pei)養(yang)瓶中,置(zhi)於 26℃恒(heng)溫(wen)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)進(jin)行(xing)原代(dai)培(pei)養(yang)。培(pei)養(yang)初期,每(mei) 2 天更(geng)換(huan)壹(yi)半(ban)培(pei)養(yang)液,待細(xi)胞匯(hui)合度達(da)到 70%-80% 時(shi)進(jin)行(xing)傳(chuan)代(dai),目(mu)前該細(xi)胞系(xi)已(yi)穩(wen)定(ding)傳代(dai)至 45 代(dai)以(yi)上(shang),細(xi)胞活(huo)力保持(chi)在 85% 以(yi)上(shang)。
該細(xi)胞系(xi)呈現典型的上(shang)皮樣細(xi)胞形(xing)態(tai),細(xi)胞呈多(duo)邊(bian)形(xing),排列(lie)緊(jin)密(mi),邊界清(qing)晰,具(ju)有(you)較強(qiang)的貼壁生長(chang)能力。生長(chang)特性研究顯示(shi),CiSK 細(xi)胞在 L-15 培(pei)養(yang)液中生長(chang)狀(zhuang)態(tai)優良,相較(jiao)於其(qi)他(ta)培(pei)養(yang)基,細(xi)胞增(zeng)殖速(su)度提高約(yue) 25%;最(zui)適培(pei)養(yang)溫(wen)度為 26-28℃,與草(cao)魚(yu)的自然生(sheng)存(cun)水溫(wen)相符(fu);當(dang)胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)濃度為 10% 時,細(xi)胞群(qun)體倍(bei)增時間(jian)最(zui)短,約(yue)為 58 小時(shi)。傳(chuan)代(dai)至 30 代(dai)後(hou),細(xi)胞形(xing)態(tai)和增殖速(su)率(lv)無(wu)明(ming)顯變(bian)化(hua),核(he)型(xing)分(fen)析(xi)表(biao)明(ming)其(qi)染色(se)體數目(mu)穩(wen)定(ding),遺傳穩(wen)定(ding)性良(liang)好(hao)。
在功(gong)能特性方(fang)面,CiSK 草(cao)魚(yu)皮膚(fu)組織細(xi)胞系(xi)展現出(chu)豐富的皮膚(fu)細(xi)胞功(gong)能。免(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)檢測發(fa)現,細(xi)胞表(biao)達(da)角蛋(dan)白(bai)等上(shang)皮細(xi)胞特(te)異性標(biao)誌(zhi)物,進(jin)壹(yi)步證(zheng)實了(le)其皮膚(fu)組織來(lai)源(yuan)屬(shu)性。該(gai)細(xi)胞系(xi)具(ju)有(you)壹定(ding)的分泌功能,能產(chan)生黏液(ye)相關(guan)蛋(dan)白(bai),模(mo)擬皮膚(fu)的黏液分泌(mi)特(te)性,這對(dui)研究皮膚(fu)的防禦(yu)機(ji)制(zhi)具(ju)有(you)重要意義(yi)。同(tong)時,CiSK 細(xi)胞對(dui)草(cao)魚(yu)常(chang)見(jian)的病原菌(jun)如柱狀(zhuang)黃(huang)桿菌(jun)、嗜水氣單(dan)胞菌(jun)等表現出(chu)敏(min)感(gan)性,感(gan)染後(hou)會(hui)出(chu)現細(xi)胞變(bian)形(xing)、脫(tuo)落(luo)等病變(bian)特(te)征,為研究病原菌(jun)對(dui)皮膚(fu)的侵染機制(zhi)提供了(le)理(li)想(xiang)模型(xing)。此(ci)外(wai),該細(xi)胞系(xi)在體外培(pei)養(yang)條件(jian)下可對(dui)損(sun)傷(shang)刺(ci)激做(zuo)出(chu)響(xiang)應,表現出(chu)壹(yi)定(ding)的增殖修復(fu)能力,為探索(suo)皮膚(fu)損(sun)傷修復(fu)機制提供了(le)良(liang)好(hao)材料(liao)。
CiSK 草(cao)魚(yu)皮膚(fu)組織細(xi)胞系(xi)在多(duo)個研究領域應用(yong)廣(guang)泛(fan)。在皮膚(fu)免(mian)疫(yi)機制研究中,通過(guo)檢測細(xi)胞在病原菌(jun)刺(ci)激下(xia)的細(xi)胞因(yin)子表達(da)變(bian)化(hua),揭(jie)示(shi)了草(cao)魚(yu)皮膚(fu)的天然免(mian)疫(yi)應答途(tu)徑;在環(huan)境毒(du)理(li)學研究中,利用(yong)該(gai)細(xi)胞系(xi)評(ping)估(gu)了(le)水體中重金(jin)屬、農(nong)藥(yao)等汙染物對(dui)皮膚(fu)細(xi)胞的毒(du)性影響(xiang),為水產(chan)養殖環(huan)境風(feng)險評估(gu)提供了(le)依據(ju);在藥(yao)物篩(shai)選(xuan)方面,建立了(le)基於細(xi)胞活(huo)性和(he)病變(bian)抑制率(lv)的篩選模型(xing),已(yi)篩(shai)選(xuan)出多(duo)種(zhong)具(ju)有(you)抗皮膚(fu)病原菌(jun)作(zuo)用(yong)的天然化(hua)合物。
作(zuo)為穩定(ding)可靠(kao)的草(cao)魚(yu)皮膚(fu)組織細(xi)胞模(mo)型,CiSK 不(bu)僅填bu了(le)草(cao)魚(yu)皮膚(fu)細(xi)胞研究的空白(bai),更(geng)為淡(dan)水魚(yu)類(lei)皮膚(fu)生(sheng)物學研究提供了(le)重(zhong)要工具(ju),推(tui)動(dong)了(le)草(cao)魚(yu)皮膚(fu)疾(ji)病防控(kong)技(ji)術(shu)的研發(fa),對(dui)保障(zhang)草(cao)魚(yu)養(yang)殖(zhi)產(chan)業的可持(chi)續(xu)發(fa)展具(ju)有(you)重要意義(yi)。
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