MDCK-6A8狗腎(shen)細(xi)胞(bao)系(xi)為貼壁生(sheng)長的(de)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)系(xi)，高(gao)表(biao)達(da)特定(ding)轉運蛋(dan)白(bai)，對藥(yao)物(wu)敏(min)感(gan)性強，適(shi)用於藥(yao)物(wu)轉運機(ji)制(zhi)、腎(shen)毒(du)性(xing)評(ping)估(gu)及(ji)藥(yao)物(wu)篩(shai)選(xuan)研究。

藥(yao)物(wu)轉運蛋(dan)白(bai)高(gao)表(biao)達(da)：高(gao)表(biao)達(da)腎(shen)臟特異(yi)性轉運蛋(dan)白(bai)如 P - 糖(tang)蛋(dan)白(bai)（P-gp，表達(da)量(liang)是(shi)普(pu)通 MDCK 細(xi)胞(bao)的(de) 4.1 倍）、有(you)機(ji)陰(yin)離子(zi)轉運體(ti) 1（OAT1，表達(da)量(liang)提(ti)升(sheng) 3.7 倍），流(liu)式(shi)檢測(ce)顯(xian)示(shi) 94% 細(xi)胞(bao)同時(shi)表達(da)兩種(zhong)轉運蛋(dan)白(bai)（普(pu)通 MDCK 細(xi)胞(bao)僅 55%）；與 MDCK-15D3 細(xi)胞(bao)的(de)病毒受體(ti)分(fen)布(bu)類(lei)似(si)，其轉運蛋(dan)白(bai)具(ju)有極性（頂(ding)端膜(mo) P-gp 與基(ji)底膜(mo) OAT1 的(de)表達(da)比(bi)為 5:1），精準模(mo)擬腎(shen)小管上(shang)皮(pi)的(de)藥(yao)物(wu)轉運方向。

藥(yao)物(wu)轉運與(yu)代謝(xie)活性：對多(duo)種(zhong)藥(yao)物(wu)的(de)轉運效(xiao)率(lv)顯(xian)著(zhu)提(ti)升(sheng)，羅丹(dan)明 123 外排(pai)率達(da) 85%（普(pu)通 MDCK 細(xi)胞(bao)為 30%），對慶da黴素的(de)攝(she)取量(liang)是(shi)普(pu)通細(xi)胞(bao)的(de) 3.8 倍；同(tong)時(shi)保留完(wan)整(zheng)的(de)藥(yao)物(wu)代(dai)謝(xie)功能，細(xi)胞(bao)色素 P450 3A 活(huo)性達(da) 52pmol/mg 蛋(dan)白(bai) /min（是(shi) MDCK-15D3 細(xi)胞(bao)的(de) 2.6 倍），可(ke)模(mo)擬藥(yao)物(wu)在腎(shen)臟的(de) Ⅰ 相(xiang)代謝(xie)過程(cheng)。

藥(yao)物(wu)敏(min)感(gan)性特征：對(dui)腎(shen)毒(du)性(xing)藥(yao)物(wu)的(de)敏感(gan)性比(bi)普(pu)通 MDCK 細(xi)胞(bao)高(gao) 3-5 倍（慶da黴素的(de) IC₅₀為 8μM，普(pu)通細(xi)胞(bao)為 35μM），且(qie)能區分(fen)不(bu)同(tong)類(lei)型藥(yao)物(wu)的(de)毒性(xing)機制(zhi) —— 對氨基(ji)糖(tang)苷(gan)類(lei)藥(yao)物(wu)表(biao)現為溶酶體損(sun)傷，對(dui)非甾體(ti)抗(kang)炎藥(yao)表(biao)現為線粒體功能障(zhang)礙（與體(ti)內(nei)腎(shen)臟損(sun)傷類(lei)型壹(yi)致(zhi)）。

轉運蛋(dan)白(bai)協(xie)同作用分(fen)析：利(li)用 MDCK-6A8 細(xi)胞(bao)發現，P-gp 與 OAT1 存在功能協(xie)同 ——OAT1 介導(dao)的(de)藥(yao)物(wu)攝(she)取增加可(ke)促(cu)進 P-gp 的(de)外排(pai)活性(xing)（提(ti)升(sheng) 2.3 倍），該(gai)協(xie)同作用依(yi)賴兩者(zhe)在細(xi)胞(bao)極性膜(mo)上(shang)的(de)共定(ding)位（共定位率達(da) 82%）；敲(qiao)除任(ren)壹(yi)轉運蛋(dan)白(bai)後(hou)，藥(yao)物(wu)凈排(pai)泄(xie)率(lv)下降(jiang) 60% 以上(shang)，證(zheng)實其在藥(yao)物(wu)腎(shen)清除中的(de)協(xie)同機制(zhi)（MDCK-15D3 細(xi)胞(bao)因轉運蛋(dan)白(bai)表達(da)低(di)，難(nan)以開(kai)展(zhan)此類(lei)研究(jiu)）。

藥(yao)物(wu)相(xiang)互(hu)作(zuo)用評(ping)估(gu)：通(tong)過該(gai)細(xi)胞(bao)系(xi)篩選(xuan)發現，中藥(yao)成(cheng)分(fen)huang芩(qin)苷可競(jing)爭性抑(yi)制(zhi) OAT1（Ki=12μM），使(shi)甲(jia)an蝶呤的(de)腎(shen)臟攝(she)取量(liang)下降(jiang) 55%，導致(zhi)細(xi)胞(bao)內(nei)藥(yao)物(wu)濃(nong)度(du)升(sheng)高(gao) 3 倍（增加腎(shen)毒(du)性(xing)風險）；該(gai)結(jie)果在動物(wu)實驗中(zhong)得到(dao)驗(yan)證(zheng)（小鼠腎(shen)臟甲(jia)an蝶呤濃(nong)度提(ti)升(sheng) 2.8 倍），為臨(lin)床(chuang)合理用(yong)藥(yao)提(ti)供依(yi)據(ju)。

腎(shen)毒(du)性(xing)早期預警(jing)模(mo)型：建立(li)基(ji)於該(gai)細(xi)胞(bao)系(xi)的(de)多(duo)參數毒(du)性評(ping)估(gu)體(ti)系(xi)，對 20 種(zhong)臨(lin)床(chuang)藥(yao)物(wu)的(de)腎(shen)毒(du)性(xing)預測(ce)準確率(lv)達(da) 85%（普(pu)通 MDCK 細(xi)胞(bao)為 60%）；其中shun鉑(bo)處理 24 小時即可檢測(ce)到(dao) γ- 谷(gu)氨酰(xian)轉肽酶活性升(sheng)高(gao)（1.8 倍）與(yu) ATP 含(han)量(liang)下降(jiang)（40%），早於普(pu)通細(xi)胞(bao)系(xi) 48 小時，體現早期預警(jing)優勢（MDCK-15D3 細(xi)胞(bao)因代(dai)謝(xie)功能弱，不(bu)適(shi)用此類(lei)評(ping)估(gu)）。

毒(du)性機制(zhi)研究：利(li)用高(gao)敏(min)感(gan)性特征，揭(jie)示(shi)馬(ma)兜鈴(ling)酸 Ⅰ 的(de)腎(shen)毒(du)性(xing)新機(ji)制(zhi) —— 通過激活(huo)內(nei)質(zhi)網應(ying)激通(tong)路（PERK 磷(lin)酸化(hua)提(ti)升(sheng) 3.2 倍），誘(you)導(dao)腎(shen)小管上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)雕亡（雕(diao)亡率(lv)達(da) 45%）；使(shi)用(yong) PERK 抑制(zhi)劑後(hou)，毒(du)性(xing)作(zuo)用下降(jiang) 65%，為開(kai)發(fa)腎(shen)保護(hu)藥(yao)物(wu)提(ti)供靶點(dian)。

腎(shen)臟靶向藥(yao)物(wu)篩(shai)選(xuan)：構建基(ji)於 OAT1 介導(dao)的(de)靶向給藥(yao)篩(shai)選(xuan)模(mo)型，發現某修飾後(hou)的(de)抗(kang)生素衍(yan)生物(wu)對 OAT1 的(de)親和(he)力(li)提(ti)升(sheng) 8 倍，腎(shen)臟攝(she)取量(liang)增加 5.2 倍，而(er)全身(shen)暴(bao)露(lu)量(liang)下降(jiang) 60%（減少系(xi)統(tong)毒(du)性(xing)）；在大(da)鼠模(mo)型中，該(gai)衍(yan)生物(wu)的(de)腎(shen)臟靶向效(xiao)率(lv)達(da)普(pu)通劑型(xing)的(de) 4.5 倍。

劑型(xing)生(sheng)物(wu)利(li)用度評(ping)估(gu)：對(dui)比(bi)普(pu)通片劑與(yu)緩(huan)釋(shi)微(wei)球(qiu)的(de)藥(yao)物(wu)轉運特征，顯(xian)示(shi)微(wei)球(qiu)制(zhi)劑在該(gai)細(xi)胞(bao)系(xi)中的(de)藥(yao)物(wu)釋(shi)放(fang)曲(qu)線(xian)與體(ti)內(nei)血藥(yao)濃(nong)度(du)曲(qu)線(xian)相(xiang)關性(xing)達(da) 0.91（普(pu)通細(xi)胞(bao)系(xi)為 0.68），可精準預測(ce)緩(huan)釋(shi)制(zhi)劑的(de)體內(nei)行為。

優(you)勢：

局限性(xing)：