MDCK-B狗(gou)腎細胞系為貼壁(bi)生(sheng)長(chang)的上(shang)皮細胞系，高表達屏障(zhang)相(xiang)關蛋白(bai)，屏(ping)障功能強(qiang)，適用(yong)於藥(yao)物(wu)跨膜轉運(yun)、屏障功能及(ji)病毒(du)侵(qin)襲機(ji)制(zhi)研(yan)究。

屏(ping)障相(xiang)關蛋白(bai)高(gao)表達：高表達緊(jin)密連(lian)接(jie)蛋白(bai)如(ru) Claudin-1（表達量是(shi)普(pu)通(tong) MDCK 細胞的 4.3 倍(bei)）、Occludin（表達量提升(sheng) 3.8 倍(bei)），以(yi)及(ji)黏附(fu)連(lian)接(jie)蛋白(bai) E - 鈣(gai)粘蛋白(bai)（表達量增加(jia) 3.2 倍(bei)）；與 MDCK-6A8 細胞的轉(zhuan)運(yun)蛋白(bai)極(ji)性分布(bu)類似，其(qi)連(lian)接(jie)蛋白(bai)主(zhu)要(yao)定位(wei)於(yu)細胞側(ce)面（占(zhan)總表達量的 85%），形成(cheng)連(lian)續(xu)的(de)屏(ping)障(zhang)結構（熒(ying)光漂白(bai)恢(hui)復(fu)實(shi)驗(yan)顯示連接(jie)完整(zheng)性(xing)是(shi)普(pu)通(tong)細胞的 3 倍(bei)）。

物(wu)質通(tong)透選擇性(xing)：對(dui)小(xiao)分子物質（如(ru)熒(ying)光su鈉(na)）的(de)通透率僅(jin)為(wei)普通 MDCK 細胞的 18%，對(dui)大分(fen)子蛋白(bai)（如(ru)白(bai)蛋(dan)白(bai)）的(de)截留率達 99.2%（普通(tong)細胞為 82%）；同(tong)時(shi)保(bao)留生(sheng)理性(xing)物質轉(zhuan)運(yun)能力，水(shui)通(tong)道(dao)蛋白(bai) 5（AQP5）介(jie)導的水(shui)通(tong)透性達 1.8μL/cm²/h（與體(ti)內腎小(xiao)管集(ji)合管水(shui)平(ping)相(xiang)當），體(ti)現屏(ping)障功(gong)能與選擇性(xing)通(tong)透的平(ping)衡。

屏(ping)障(zhang)調(tiao)控(kong)響應(ying)性(xing)：對(dui)炎(yan)癥(zheng)因(yin)子敏感(gan)，TNF-α 處(chu)理 24 小(xiao)時(shi)可(ke)使(shi) TEER 值下降(jiang) 45%（普通(tong) MDCK 細胞僅下(xia)降(jiang) 15%），伴隨 Claudin-1 磷(lin)酸(suan)化(hua)水(shui)平(ping)升(sheng)高 2.3 倍(bei)（導致連接(jie)解離）；該(gai)反(fan)應(ying)可(ke)被(bei)糖皮質激(ji)素逆轉(zhuan)（恢復(fu)率(lv)達 70%），模(mo)擬(ni)體(ti)內屏(ping)障功(gong)能的動態調(tiao)節(jie)過(guo)程。

緊(jin)密連(lian)接(jie)組裝(zhuang)機(ji)制(zhi)：利(li)用(yong) MDCK-B 細胞發(fa)現，Claudin-1 的(de)第 147 位(wei)絲(si)an酸(suan)磷(lin)酸化(hua)是(shi)連(lian)接(jie)組裝(zhuang)的(de)關鍵(jian)（磷酸化(hua)率達 65% 時(shi) TEER 值最高(gao)）；敲(qiao)除該位(wei)點後(hou)，緊(jin)密連(lian)接(jie)線性(xing)結構破(po)壞率(lv)達 70%，證實(shi)其(qi)在(zai)屏障形成(cheng)中(zhong)的核心作(zuo)用(yong)（MDCK-6A8 細胞因連(lian)接(jie)蛋白(bai)表達低，難(nan)以(yi)開展此(ci)類研究）。

屏障與轉運(yun)協(xie)同(tong)調(tiao)控(kong)：通過(guo)共聚焦顯微鏡(jing)觀察(cha)發(fa)現，AQP5 與緊(jin)密連(lian)接(jie)蛋白(bai)存(cun)在共定位(wei)（相(xiang)關系數 0.78），滲透壓(ya)刺(ci)激(ji)可使(shi)兩(liang)者共定位(wei)率(lv)提升(sheng)至(zhi) 88%（同時(shi) TEER 值維持(chi)穩(wen)定(ding)）；該(gai)協(xie)同(tong)作(zuo)用(yong)確(que)保(bao)水(shui)轉(zhuan)運(yun)時(shi)屏(ping)障完整(zheng)性(xing)，敲(qiao)除 AQP5 後(hou)，高滲(shen)條(tiao)件(jian)下 TEER 值下降(jiang) 50%，揭示功能代償(chang)機(ji)制(zhi)。

吸收屏障(zhang)評估(gu)模(mo)型(xing)：建立(li)基於(yu)該細胞系的藥物吸收預測(ce)模(mo)型(xing)，對(dui) 30 種藥(yao)物的表觀滲透系數（Papp）測(ce)定(ding)值與人體(ti)小(xiao)腸吸(xi)收數據相關(guan)性(xing)達 0.89（普通(tong) MDCK 細胞為 0.65）；其(qi)中(zhong)極性藥(yao)物的(de)轉運(yun)差異(yi)最(zui)xian著（如甘(gan)lu醇的(de) Papp 值僅為(wei)普(pu)通細胞的 1/5），更(geng)接(jie)近體(ti)內吸(xi)收特征(zheng)（MDCK-6A8 細胞因屏(ping)障弱，不適用(yong)此(ci)類評估(gu)）。

毒(du)物(wu)屏障(zhang)損傷(shang)機(ji)制(zhi)：研(yan)究顯示，重金屬(shu)鎘離子可特異(yi)性(xing)結合 Occludin 的巰(qiu)基（結合常數 3.2×10⁻⁷M），導致蛋白(bai)構象改(gai)變(bian)與泛(fan)素化降(jiang)解（降(jiang)解率 55%）；使(shi)用(yong)巰(qiu)基保(bao)護劑後(hou)，屏障(zhang)損傷(shang)減(jian)輕 60%，為重金屬(shu)中(zhong)毒(du)防(fang)護提(ti)供靶(ba)點。

病(bing)毒(du)跨屏障機(ji)制(zhi)解析：在(zai) MDCK-B 細胞模(mo)型(xing)中(zhong)，流感(gan)病毒(du)需(xu)先(xian)破(po)壞緊(jin)密連(lian)接(jie)（使(shi) Claudin-1 表達下降(jiang) 40%）才能實現跨上(shang)皮傳播(bo)，該(gai)過(guo)程依賴(lai)病毒(du) NA 蛋(dan)白(bai)的(de)蛋白(bai)酶活性(xing)（抑(yi)制(zhi) NA 後(hou)跨屏障率(lv)下(xia)降(jiang) 75%）；與 MDCK-15D3 細胞的病(bing)毒(du)復(fu)制(zhi)研(yan)究不同，該模(mo)型(xing)可區分病毒(du)黏(nian)附(fu)、入(ru)侵(qin)與擴(kuo)散的(de)不(bu)同階段(duan)。

屏(ping)障保護藥(yao)物篩(shai)選：構建基於(yu) TEER 值的高(gao)通(tong)量篩(shai)選模(mo)型(xing)，發(fa)現某(mou)天然(ran)黃酮類化合物可穩(wen)定(ding)緊(jin)密連(lian)接(jie)（使(shi) TNF-α 誘(you)導的 TEER 下降(jiang)率從(cong) 45% 降(jiang)至(zhi) 15%），同時(shi)不(bu)影(ying)響正(zheng)常物質轉(zhuan)運(yun)；在動物(wu)模(mo)型(xing)中(zhong)，該化合物可使(shi)流感(gan)病毒(du)肺(fei)部擴(kuo)散率(lv)下(xia)降(jiang) 60%，顯示抗感(gan)染(ran)輔助(zhu)治(zhi)療潛(qian)力。

優(you)勢(shi)：

局(ju)限(xian)性：