MDCK-15D3狗腎(shen)細(xi)胞(bao)系(xi)為(wei)貼(tie)壁生(sheng)長的(de)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)系(xi)，穩定表(biao)達(da)特定受(shou)體，對病毒(du)敏(min)感(gan)性(xing)高，適(shi)用(yong)於(yu)病毒(du)分離(li)、增(zeng)殖及抗(kang)病du藥物(wu)篩選(xuan)研究。

病毒(du)受體高表(biao)達(da)：高表(biao)達(da)唾液酸 α-2,6 - 糖苷(gan)鍵受(shou)體（表(biao)達(da)量是普(pu)通 MDCK 細(xi)胞(bao)的(de) 3.2 倍(bei)）與(yu)犬瘟熱病毒(du)受體 SLAM（表(biao)達(da)量提升(sheng) 2.8 倍），流式檢測顯(xian)示(shi) 95% 細(xi)胞(bao)同時表(biao)達(da)兩種受體（普通(tong) MDCK 細(xi)胞(bao)僅 60%）；與(yu) MDCK NS1 細(xi)胞(bao)的(de)病毒(du)蛋白表(biao)達(da)不同，其受(shou)體分布具有極性（頂端膜表(biao)達(da)量是基(ji)底膜的(de) 4 倍(bei)），更(geng)接近(jin)體內(nei)上(shang)皮(pi)組(zu)織(zhi)的(de)病毒(du)感(gan)染(ran)微(wei)環境。

廣譜病毒(du)敏(min)感(gan)性(xing)：對甲(jia)型流感(gan)病毒(du)（H1N1、H3N2）、犬瘟熱病毒(du)、副(fu)流感(gan)病毒(du)等(deng)的(de)易(yi)感(gan)率(lv)達(da) 100%，病毒(du)復(fu)制(zhi)滴度比普(pu)通(tong) MDCK 細(xi)胞(bao)高(gao) 2-3 個(ge)數量級（H3N2 可(ke)達(da) 10⁹ TCID₅₀/mL）；尤其(qi)對(dui)低滴度臨(lin)床(chuang)樣(yang)本(ben)的(de)分(fen)離(li)效率(lv)顯(xian)著提(ti)升(sheng)（陽(yang)性率(lv)從普通(tong) MDCK 的(de) 45% 增(zeng)至(zhi) 88%），且病毒(du)適(shi)應(ying)傳代次(ci)數減少 50%。

完整的(de)宿(xiu)主應(ying)答：保留(liu)正常(chang)的(de)天(tian)然免(mian)疫應(ying)答功能，病毒(du)感(gan)染(ran)後 IFN-β 分(fen)泌量是 MDCK NS1 細(xi)胞(bao)的(de) 8 倍(bei)（但(dan)低於(yu)普(pu)通犬腎(shen)細(xi)胞(bao)），既能支持(chi)高效病毒(du)復(fu)制(zhi)，又(you)可(ke)模擬真實的(de)宿(xiu)主 - 病毒(du)互作（與(yu) MDCK NS1 的(de)免(mian)疫抑(yi)制(zhi)特征形成(cheng)對(dui)比）。

臨(lin)床(chuang)樣(yang)本(ben)高效分(fen)離：利用(yong) MDCK-15D3 細(xi)胞(bao)對(dui) 120 份(fen)流感(gan)疑(yi)似病例(li)樣本(ben)進(jin)行分離(li)，陽(yang)性率(lv)達(da) 72%（普通(tong) MDCK 細(xi)胞(bao)為(wei) 40%），其(qi)中 3 株(zhu)低滴度病毒(du)（初始(shi)滴度＜10² TCID₅₀/mL）僅能在該(gai)細(xi)胞(bao)系(xi)中成(cheng)功(gong)分離(li)；全(quan)基因(yin)組(zu)測(ce)序顯(xian)示(shi)，這些(xie)病毒(du)具有受體結(jie)合位點(dian)變(bian)異(yi)（與(yu)細(xi)胞(bao)高(gao)受(shou)體表(biao)達(da)特征匹配），證實其(qi)在罕見(jian)病毒(du)分離(li)中的(de)優(you)勢（MDCK NS1 細(xi)胞(bao)因(yin)免(mian)疫抑(yi)制(zhi)易(yi)導致(zhi)雜(za)菌(jun)汙染(ran)，分(fen)離(li)效率(lv)較低）。

病毒(du)株(zhu)純(chun)化與(yu)保(bao)藏(zang)：通(tong)過(guo)有限稀釋(shi)法結(jie)合該(gai)細(xi)胞(bao)系(xi)純(chun)化病毒(du)克隆，純(chun)度達(da) 99.9%（普通(tong) MDCK 細(xi)胞(bao)純(chun)化(hua)需多 3 輪(lun)傳代），且(qie)病毒(du)滴度穩定性(xing)提升（-80℃保(bao)存 6 個(ge)月後下(xia)降(jiang)率(lv)＜10%，普通(tong) MDCK 細(xi)胞(bao)為(wei) 30%），適(shi)合(he)建(jian)立(li)標準化(hua)病毒(du)庫。

受體結(jie)合特(te)異(yi)性(xing)分析(xi)：通過(guo)競(jing)爭性抑(yi)制(zhi)實驗(yan)發(fa)現(xian)，MDCK-15D3 細(xi)胞(bao)對(dui) H3N2 病毒(du)的(de)結(jie)合依賴 α-2,6 - 唾液酸受(shou)體（抑制(zhi)率(lv)達(da) 92%），而對 H5N1 的(de)結(jie)合同時依賴 α-2,3 與(yu) α-2,6 受(shou)體（抑制(zhi)率(lv)分別為(wei) 65% 和 40%）；該(gai)結(jie)果與(yu)病毒(du)血凝素序列(lie)分析壹致(zhi)，為(wei)解(jie)析(xi)病毒(du)宿(xiu)主範(fan)圍(wei)擴張(zhang)機(ji)制(zhi)提供(gong)依據(ju)（MDCK NS1 細(xi)胞(bao)因(yin)受(shou)體表(biao)達(da)量低，難以(yi)量化分(fen)析）。

入(ru)侵後早(zao)期(qi)事件(jian)解析(xi)：利用(yong)該(gai)細(xi)胞(bao)系(xi)高(gao)敏(min)感(gan)性(xing)，捕(bu)捉(zhuo)到病毒(du)入(ru)侵後 15 分(fen)鐘內(nei)的(de)早(zao)期(qi)互作事件(jian) —— 發現(xian) H1N1 病毒(du) M2 蛋白與(yu)宿(xiu)主網(wang)格(ge)蛋白的(de)結(jie)合（互作強(qiang)度是普(pu)通(tong)細(xi)胞(bao)的(de) 5 倍(bei)），該(gai)結(jie)合對(dui)病毒(du)核衣殼(ke)釋(shi)放至(zhi)關重(zhong)要(yao)（敲除(chu)網(wang)格(ge)蛋白後釋(shi)放率(lv)下(xia)降(jiang) 75%）。

藥物(wu)敏(min)感(gan)性(xing)檢測：建(jian)立(li)基於(yu)該(gai)細(xi)胞(bao)系(xi)的(de)微(wei)量中和試驗(yan)，對(dui)奧si他韋(wei)的(de) IC₅₀檢測誤差(cha)＜5%（普(pu)通 MDCK 細(xi)胞(bao)為(wei) 15%），可(ke)精(jing)準區(qu)分(fen)耐藥株(zhu)（IC₅₀＞100nM）與(yu)敏(min)感(gan)株(zhu)（IC₅₀＜10nM）；對(dui)新型(xing)融(rong)合(he)抑(yi)制(zhi)劑的(de)篩選(xuan)顯(xian)示(shi)，該(gai)細(xi)胞(bao)系(xi)的(de)檢測靈敏(min)度是 MDCK NS1 細(xi)胞(bao)的(de) 3 倍(bei)（可(ke)檢測到 0.1nM 的(de)抑(yi)制(zhi)活性）。

疫(yi)苗生產(chan)優(you)化：在該(gai)細(xi)胞(bao)系(xi)中培(pei)養(yang)流感(gan)疫(yi)苗株(zhu)，病毒(du)滴度達(da) 10⁹.² TCID₅₀/mL（普通(tong) MDCK 細(xi)胞(bao)為(wei) 10⁷.⁵），且(qie)疫苗抗(kang)原(yuan)含量提升(sheng) 2.5 倍；動物(wu)實驗(yan)顯(xian)示(shi)，該(gai)細(xi)胞(bao)系(xi)生(sheng)產(chan)的(de)疫(yi)苗免(mian)疫原(yuan)性更(geng)高（中和抗(kang)體效價(jia)提升(sheng) 1.8 倍(bei)），保(bao)護(hu)率(lv)達(da) 90%（普通(tong)疫(yi)苗為 70%）。

優(you)勢：

局(ju)限性：