MDCK NS1狗(gou)腎(shen)細(xi)胞(bao)系為穩定表達流(liu)感(gan)病毒 NS1 蛋(dan)白(bai)的(de)上皮(pi)細(xi)胞(bao)系，貼壁生長，可(ke)抑(yi)制宿(xiu)主(zhu)幹(gan)擾素應答(da)，適(shi)用於(yu)流(liu)感病毒復制、抗(kang)病毒機制及(ji)藥(yao)物篩選研究(jiu)。

NS1 蛋(dan)白(bai)表達與活性：NS1 蛋(dan)白(bai)表達量(liang)達(da) 3.8μg/mg 總(zong)蛋(dan)白(bai)（Western blot 定量），可(ke)形(xing)成(cheng)二(er)聚(ju)體(ti)結(jie)構（凝(ning)膠(jiao)過(guo)濾顯示(shi)分(fen)子量(liang)約 46kDa），具備(bei) RNA 結(jie)合(he)活性（與雙鏈 RNA 的(de)結(jie)合(he)常數為 2.1×10⁻⁸M）；與 GSnFB-L2 細胞中(zhong)病毒自然表達的(de) NS1 不(bu)同，該細胞(bao)系可通(tong)過(guo)誘導型(xing)啟(qi)動(dong)子調控(kong) NS1 表達（四環素處理(li)後(hou)表達量(liang)提(ti)升 5 倍），實(shi)現(xian)蛋(dan)白(bai)功(gong)能的時空可控(kong)研究(jiu)。

宿(xiu)主(zhu)天(tian)然(ran)免(mian)疫(yi)抑制：NS1 蛋(dan)白(bai)可(ke)顯著抑(yi)制(zhi)幹擾素通(tong)路激活 —— 病毒 RNA 刺激後(hou)，IFN-β 啟動(dong)子活性僅為普通(tong) MDCK 細胞(bao)的 15%，IRF3 磷(lin)酸(suan)化(hua)水平下(xia)降 75%；同時抑制炎癥因子分(fen)泌(mi)（IL-6、TNF-α 含量分別(bie)降低(di) 60%、55%），與 GSnFB-L2 細胞的(de)天(tian)然(ran)免(mian)疫(yi)耐受特征(zheng)不(bu)同，其免(mian)疫(yi)抑制具有(you) NS1 依賴性（敲(qiao)除 NS1 後恢(hui)復(fu)至(zhi)普通(tong) MDCK 水平）。

流感(gan)病毒復制支持(chi)：對(dui)多(duo)種(zhong)亞(ya)型(xing)流(liu)感(gan)病毒（H1N1、H3N2、H5N1）的易感(gan)率(lv)達(da) 100%，病毒復制滴(di)度(du)比(bi)普通(tong) MDCK 細胞(bao)高 1-2 個(ge)數量級(ji)（H1N1 可達(da) 10⁸.⁵ TCID₅₀/mL），且病毒釋放效率(lv)提(ti)升 40%（病毒粒(li)子釋(shi)放量與細胞內復制量(liang)比(bi)值(zhi)為(wei) 0.65，普通(tong) MDCK 為 0.45）。

免(mian)疫(yi)逃逸(yi)分(fen)子機(ji)制：利(li)用 MDCK NS1 細(xi)胞(bao)發(fa)現(xian)，NS1 蛋(dan)白(bai)通(tong)過(guo)與宿(xiu)主(zhu)蛋(dan)白(bai) RIG-I 的(de) CARD 結(jie)構域(yu)結(jie)合(he)（相(xiang)互(hu)作用(yong)強度(du)是(shi)普通(tong) MDCK 細胞(bao)的 8 倍(bei)），阻斷 RIG-I 介導的(de)信(xin)號傳導；解(jie)析復(fu)合(he)物晶(jing)體結(jie)構顯示(shi)，NS1 的(de)第 92-105 位氨(an)基(ji)酸是(shi)關(guan)鍵結(jie)合(he)區域(yu)，突變(bian)該區域(yu)後，IFN-β 抑(yi)制(zhi)率(lv)從(cong) 85% 降至(zhi) 30%（該機制(zhi)在(zai) GSnFB-L2 細(xi)胞(bao)中(zhong)因 NS1 表達量(liang)低(di)難以(yi)研(yan)究(jiu)）。

病毒 - 宿(xiu)主(zhu)互(hu)作網(wang)絡(luo)：通(tong)過(guo)免(mian)疫(yi)共沈澱結(jie)合(he)質(zhi)譜分析(xi)，鑒(jian)定出(chu) 38 個(ge) NS1 互(hu)作宿(xiu)主(zhu)蛋(dan)白(bai)，其(qi)中(zhong)剪(jian)接因子 SF3A1 的(de)結(jie)合(he)可(ke)促(cu)進(jin)病毒 mRNA 剪(jian)接（病毒 NP 蛋(dan)白(bai)表達量(liang)提(ti)升 2.3 倍）；敲(qiao)除 SF3A1 後，NS1 介導的(de)病毒復制增(zeng)強效應(ying)消失，證實(shi)其在(zai)病毒復制中(zhong)的輔(fu)助(zhu)作用(yong)。

高敏(min)感性藥物篩選模型(xing)：建(jian)立(li)基(ji)於(yu) MDCK NS1 細(xi)胞的(de)高(gao)通(tong)量篩(shai)選體系，對 1200 種(zhong)化(hua)合(he)物進(jin)行(xing)評(ping)估(gu)，發(fa)現(xian)某(mou)小分子可(ke)特異(yi)性抑制 NS1-RNA 結(jie)合(he)（IC₅₀=0.7μM），在(zai)細(xi)胞(bao)模(mo)型(xing)中(zhong)使 H1N1 病毒滴度(du)下(xia)降 10⁴倍（普通(tong) MDCK 細胞(bao)中(zhong)僅下(xia)降 10² 倍）；該化合(he)物對 NS1 突變(bian)體病毒的抑制(zhi)活性降低 80%，證實(shi)其靶向性（與 GSnFB-L2 細胞的(de)廣(guang)譜抗病毒篩選形(xing)成(cheng)機(ji)制(zhi)互(hu)補(bu)）。

耐藥(yao)機(ji)制研究(jiu)：通(tong)過(guo)連(lian)續(xu)傳代誘導病毒耐藥株(zhu)，發(fa)現(xian) NS1 蛋(dan)白(bai)第 103 位氨(an)基(ji)酸突變(bian)（K→E）可使上述小分子藥(yao)物的抑制(zhi)活性下(xia)降 50 倍，同時保留(liu)對(dui) IFN-β 的抑(yi)制功能；結(jie)構模(mo)擬顯示(shi)該突變(bian)導致(zhi)藥(yao)物結(jie)合(he)口袋構象(xiang)改變(bian)，為耐藥(yao)病毒的藥物設計(ji)提(ti)供依據。

減(jian)毒活疫苗(miao)篩(shai)選：利(li)用 NS1 表達調控(kong)特性，構建(jian) NS1 部(bu)分缺失的重(zhong)組(zu)病毒，在(zai) MDCK NS1 細(xi)胞(bao)中(zhong)篩選出(chu)毒(du)力減(jian)弱(ruo)但免(mian)疫(yi)原性保留(liu)的(de)疫苗(miao)候選株（對(dui)小鼠的(de)致(zhi)病率從(cong) 80% 降至(zhi) 10%，中(zhong)和抗(kang)體(ti)效價保持(chi) 1:640）；該疫苗(miao)在(zai)動(dong)物模型(xing)中(zhong)顯示(shi)交(jiao)叉保護(hu)作用(yong)（對(dui) H3N2 的保護(hu)率達 75%）。

幹擾素抑制(zhi)劑(ji)協同應用(yong)：發(fa)現(xian) NS1 蛋(dan)白(bai)可(ke)增強幹擾素抑制(zhi)劑(ji)的(de)抗(kang)病毒效果(guo) —— 聯(lian)合(he)使用 NS1 與 JAK 抑制劑(ji)時，病毒清除率從(cong)單獨(du)用(yong)藥的(de) 60% 提(ti)升至 90%，且(qie)細(xi)胞毒性降低 30%，為(wei)重(zhong)癥(zheng)流(liu)感(gan)的聯合(he)治(zhi)療提(ti)供新(xin)策略。

優勢：

局(ju)限(xian)性：