MDCK-G01犬腎(shen)細胞(bao)系(xi)為(wei)穩(wen)定(ding)表(biao)達(da) β-1,4 - 半(ban)乳糖轉(zhuan)移(yi)酶(mei) 1 的(de)上(shang)皮細(xi)胞系(xi)，貼壁(bi)生長，強化(hua)糖(tang)基化(hua)修(xiu)飾(shi)，適(shi)用(yong)於病毒(du)糖(tang)基化(hua)機(ji)制、疫(yi)苗優化(hua)及(ji)糖靶(ba)向藥(yao)物研究。

精準糖基化(hua)調控(kong)：突變(bian)型 β4GalT1 對 N - 糖鏈五糖(tang)核心的(de)結(jie)合效(xiao)率(lv)達(da) 89%（MDCK-G1 為(wei) 56%），可(ke)特異性促(cu)進(jin)雙天(tian)線(xian)型糖鏈末端(duan)半(ban)乳糖修(xiu)飾(shi)（比例達(da) 72%，MDCK-G1 為(wei) 65%），而(er)對雜合型糖鏈的(de)調控(kong)作用(yong)下降 40%；與 MDCK-G1 的(de)廣(guang)譜(pu)修(xiu)飾(shi)不同，其可(ke)定向增(zeng)強流(liu)感(gan)病毒(du) HA 蛋(dan)白(bai)第(di) 183 位、271 位等關(guan)鍵(jian)位點(dian)的(de)糖(tang)基化(hua)（利(li)用(yong)率(lv)從(cong) MDCK-G1 的(de) 90% 提(ti)升(sheng)至 98%），實現單(dan)個(ge)糖(tang)基化(hua)位點(dian)的(de)功能解析(xi)。

病(bing)毒(du)糖(tang)蛋(dan)白(bai)結(jie)構(gou)優化(hua)：支(zhi)持(chi)流(liu)感(gan)病毒(du)復制時(shi)，HA 蛋白(bai)的(de)特(te)定糖(tang)基化(hua)位點(dian)修(xiu)飾(shi)均(jun)壹性達(da) 91%（MDCK-G1 為(wei) 78%），三(san)聚(ju)體(ti)構象穩(wen)定(ding)性提(ti)升(sheng) 25%（熱(re)變(bian)性溫(wen)度提(ti)高 3℃）；純(chun)化(hua)的(de) HA 蛋(dan)白與(yu)中(zhong)和抗(kang)體(ti)的(de)結(jie)合動(dong)力學顯(xian)示(shi)，其(qi)解(jie)離常數(shu)（Kd）比 MDCK-G1 來源(yuan)蛋白低(di) 30%，提(ti)示(shi)糖(tang)鏈(lian)結構均壹性對(dui)蛋(dan)白構(gou)象的(de)優化(hua)作(zuo)用(yong)。

免(mian)疫(yi)原性定(ding)向調節(jie)：經(jing)該細(xi)胞(bao)系(xi)生產(chan)的(de)病(bing)毒(du)樣(yang)顆粒(li)（VLP），其(qi)特定糖表(biao)位的(de)暴露量是 MDCK-G1 的(de) 1.5 倍(bei)，可誘(you)導針(zhen)對(dui)糖 - 蛋(dan)白(bai)復合表(biao)位的(de)抗(kang)體(ti)比例提(ti)升(sheng) 40%，這(zhe)種抗體(ti)對變(bian)異(yi)株(zhu)的(de)交叉中(zhong)和活(huo)性比 MDCK-G1 誘導抗(kang)體(ti)高 2 倍(bei)，體(ti)現精準糖基化(hua)對(dui)免(mian)疫(yi)原性的(de)定(ding)向調控(kong)價值。

關(guan)鍵(jian)糖(tang)基化(hua)位點(dian)的(de)作(zuo)用(yong)解析：利(li)用(yong) MDCK-G01 的(de)精準調控(kong)能力，發(fa)現(xian)流(liu)感(gan)病毒(du) HA 蛋(dan)白(bai)第(di) 183 位糖基化(hua)可(ke)穩(wen)定(ding)其(qi)與(yu)受體(ti)結合的(de)構(gou)象（缺失後(hou)結合力下降 75%），而第(di) 271 位糖基化(hua)主(zhu)要影(ying)響免(mian)疫(yi)逃逸(yi)（缺失後(hou)抗體(ti)中(zhong)和效(xiao)價(jia)提(ti)升(sheng) 3 倍(bei)）；這(zhe)些結(jie)論(lun)在 MDCK-G1 中(zhong)因糖(tang)基化(hua)均(jun)壹性不足(zu)難(nan)以驗(yan)證，證實其在單(dan)壹(yi)糖位點(dian)功能研究(jiu)中(zhong)的(de)不可(ke)替代性。

糖(tang)鏈(lian)長度與(yu)病毒(du)傳(chuan)播(bo)的(de)關(guan)聯：通(tong)過調控(kong) HA 蛋白糖(tang)鏈長度發(fa)現，含 5 個(ge)半(ban)乳糖殘基的(de)糖(tang)鏈可(ke)使(shi)病(bing)毒(du)在細(xi)胞間傳(chuan)播(bo)效(xiao)率(lv)提(ti)升(sheng) 50%（MDCK-G1 因糖(tang)鏈長度不均(jun)難(nan)以量(liang)化(hua)），且(qie)該(gai)長度與(yu)犬呼(hu)吸道黏(nian)液(ye)環(huan)境(jing)的(de)兼容(rong)性最佳，揭(jie)示(shi)糖鏈結(jie)構(gou)對(dui)病毒(du)組織擴散(san)的(de)影(ying)響。

多價(jia)疫(yi)苗的(de)糖(tang)基化(hua)匹(pi)配(pei)：在犬(quan)流感(gan) - 冠狀(zhuang)病(bing)毒(du)二(er)價(jia)疫(yi)苗研(yan)發(fa)中(zhong)，MDCK-G01 可(ke)分(fen)別優化(hua)兩(liang)種病毒(du)糖(tang)蛋(dan)白(bai)的(de)關(guan)鍵(jian)糖(tang)基化(hua)位點(dian)，使(shi)流(liu)感(gan) HA 蛋白與冠狀(zhuang)病(bing)毒(du) S 蛋(dan)白(bai)的(de)免(mian)疫(yi)原性協(xie)同提(ti)升(sheng)（聯合免(mian)疫(yi)效(xiao)價(jia)比 MDCK-G1 生產(chan)的(de)疫(yi)苗高 2.1 倍(bei)）；其(qi)優勢(shi)在於避免(mian) MDCK-G1 的(de)廣(guang)譜(pu)修(xiu)飾(shi)導致(zhi)的(de)免(mian)疫(yi)幹擾，實現多抗(kang)原糖基化(hua)的(de)精準平衡(heng)。

個(ge)性化(hua)疫(yi)苗的(de)定(ding)制生產(chan)：針(zhen)對不同犬種的(de)免(mian)疫(yi)差異(yi)，通(tong)過 MDCK-G01 調節(jie)疫(yi)苗糖(tang)蛋(dan)白的(de)末(mo)端(duan)唾液(ye)酸修(xiu)飾(shi)比例（從(cong) 30% 至 60% 可調），使(shi)貴(gui)賓(bin)犬(quan)的(de)抗(kang)體(ti)陽(yang)轉率(lv)從(cong) MDCK-G1 疫(yi)苗的(de) 70% 提(ti)升(sheng)至 92%，解決(jue)了(le)傳(chuan)統疫(yi)苗在不同品種犬中(zhong)免(mian)疫(yi)效(xiao)果(guo)差異(yi)大的(de)問(wen)題(ti)。

位點(dian)特(te)異(yi)性抑(yi)制劑開發：建立基於單(dan)壹(yi)糖基化(hua)位點(dian)的(de)篩(shai)選模(mo)型，某小分子化(hua)合物可特異(yi)性抑(yi)制 HA 第(di) 183 位糖基化(hua)（對(dui) 271 位無(wu)影(ying)響），在 MDCK-G01 中(zhong)使(shi)病(bing)毒(du)復制抑(yi)制率(lv)達(da) 90%，而在 MDCK-G1 中(zhong)因同時(shi)影(ying)響多個(ge)位點(dian)導致(zhi)毒(du)副(fu)作(zuo)用(yong)增(zeng)加（細胞存活率(lv)下降 40%），體(ti)現精準靶(ba)向的(de)優勢(shi)。

糖 - 蛋白復合表(biao)位抗體(ti)篩選：利(li)用(yong) MDCK-G01 表(biao)達(da)的(de)均(jun)壹性糖(tang) - 蛋(dan)白復合物，篩選出可識(shi)別 HA 第(di) 183 位糖 - 肽復合表(biao)位的(de)抗(kang)體(ti)，該抗體(ti)在犬(quan)體(ti)內對不同亞型流感(gan)病毒(du)的(de)保(bao)護率(lv)達(da) 85%（MDCK-G1 來源(yuan)抗體(ti)為(wei) 60%），且(qie)不易(yi)受糖(tang)基化(hua)變(bian)異(yi)影(ying)響。

優勢(shi)：

局(ju)限(xian)性：