MDCK-XF04犬腎細(xi)胞系(xi)為穩(wen)定(ding)表達(da) IRF9 的(de)上(shang)皮(pi)細(xi)胞系(xi)，貼(tie)壁生長(chang)，強化(hua)幹擾素(su)下遊(you)信(xin)號，適用(yong)於 ISG 通路(lu)機(ji)制、病毒復(fu)制抑(yi)制及免(mian)疫效(xiao)應(ying)藥物(wu)研究(jiu)。

幹擾素(su)下遊(you)通(tong)路(lu)強(qiang)化(hua)：IRF9 與(yu) STAT1/STAT2 形成(cheng) ISGF3 復合物(wu)的效(xiao)率(lv)達 85%（野(ye)生型為 30%，MDCK-XF03 為 40%），該(gai)復(fu)合(he)物(wu)結合(he) ISRE 元件的能力提升(sheng) 4 倍，可顯著(zhu)促進(jin) ISG 表(biao)達(da)，MX1、OAS1 等抗病毒蛋(dan)白(bai)的含(han)量(liang)達(da)野(ye)生型的 5.8 倍(bei)（MDCK-XF03 為 2.3 倍(bei)）；與(yu) MDCK-XF03 的(de)早(zao)期激活(huo)功(gong)能不(bu)同(tong)，其(qi)核心(xin)作(zuo)用(yong)於幹擾素(su)通(tong)路(lu)的(de)效(xiao)應(ying)階段(duan)，ISG 表(biao)達(da)峰值(zhi)比 MDCK-XF03 延(yan)遲 6 小(xiao)時(shi)，但持(chi)續時(shi)間(jian)延(yan)長(chang)至(zhi) 48 小(xiao)時，體(ti)現 “長(chang)效(xiao)抑(yi)制" 特(te)征(zheng)。

病毒復(fu)制後期抑(yi)制：對犬(quan)流(liu)感(gan)病毒的(de)復(fu)制階段(duan)抑(yi)制率達(da) 80%（MDCK-XF03 為 40%），可阻(zu)斷病毒 RNA 合(he)成(cheng)（抑(yi)制率 75%）和(he)蛋(dan)白(bai)翻譯（抑(yi)制率 68%），使(shi)病毒釋放量(liang)下降 90%；培養上清中病毒滴(di)度(du)在(zai)感染後(hou) 24 小(xiao)時(shi)僅(jin)為 10⁴.² TCID₅₀/mL（是 MDCK-XF03 同(tong)期的 1/6），且(qie)後期抑(yi)制效(xiao)guo顯(xian)著（48 小(xiao)時(shi)後(hou)抑(yi)制率仍(reng)達(da) 70%），與(yu) IRF3 的(de)早(zao)期防控(kong)特(te)征(zheng)形(xing)成(cheng)階段互補。

ISG 協(xie)同(tong)效(xiao)應(ying)：與 MDCK-XF03 的(de) IRF3 不(bu)同(tong)，其(qi) IRF9 可協(xie)調多(duo)種(zhong) ISG 的表(biao)達比(bi)例(li)，MX1 與 OAS1 的表(biao)達(da)量(liang)比(bi)值(zhi)穩(wen)定(ding)在(zai) 1.2:1（野(ye)生型波動(dong)範圍 0.5-2.0），這(zhe)種(zhong)平(ping)衡(heng)使(shi)抗病毒效(xiao)果(guo)提升(sheng) 30%；在(zai)單壹(yi) ISG 被(bei)抑(yi)制時，其(qi)他 ISG 可代償(chang)性(xing)上(shang)調(tiao)（補償(chang)效(xiao)率(lv)達 60%，MDCK-XF03 僅(jin)為 20%），顯(xian)示(shi)其(qi)在(zai)效(xiao)應(ying)階段(duan)的(de)穩(wen)健性(xing)。

ISGF3-ISG 調(tiao)控(kong)軸(zhou)解析(xi)：利(li)用(yong) MDCK-XF04 的效(xiao)應(ying)階段(duan)優(you)勢(shi)，發(fa)現 ISGF3 復(fu)合(he)物(wu)在(zai) MX1 啟動子(zi)區域的結(jie)合(he)可招(zhao)募組(zu)蛋(dan)白(bai)乙酰轉移(yi)酶（HAT），使(shi)染色(se)質(zhi)開(kai)放程(cheng)度(du)提升(sheng) 2 倍（MDCK-XF03 因(yin)缺(que)乏(fa) IRF9 過表(biao)達(da)無(wu)法(fa)觀察(cha)）；敲除 IRF9 後，ISG 表達(da)下降 95%，證(zheng)實(shi)其在(zai)下遊(you)效(xiao)應(ying)中的核心(xin)作(zuo)用(yong)。

IRF9 與 IRF3 的階段(duan)協(xie)作(zuo)：通過(guo)時(shi)序分析(xi)發(fa)現，IRF3 激(ji)活(huo)的 IFN-β 可誘導(dao) IRF9 表達(da)（峰值(zhi)在(zai)感染後(hou) 8 小(xiao)時(shi)），而 IRF9 介(jie)導(dao)的 ISG 可反饋(kui)穩(wen)定(ding) IRF3 的活(huo)性(xing)（延(yan)長(chang)半衰(shuai)期 1.5 倍），在(zai) MDCK-XF04 中人為阻(zu)斷 IRF9 後，MDCK-XF03 的(de)早(zao)期抑(yi)制效(xiao)果(guo)在(zai) 12 小時(shi)後下降 50%，揭示(shi)兩(liang)者 “啟動 - 效(xiao)應(ying)" 的階(jie)段(duan)協(xie)同(tong)關(guan)系(xi)。

ISG 拮抗策略：在(zai) MDCK-XF04 中發(fa)現，犬(quan)瘟熱(re)病毒 V 蛋(dan)白(bai)可與 IRF9 直(zhi)接結(jie)合(he)（結(jie)合常數(shu) 2.5×10⁻⁹M），阻(zu)止 ISGF3 復合(he)物(wu)形成(cheng)（抑(yi)制率 70%），該(gai)現象(xiang)在(zai) MDCK-XF03 中因(yin) IRF9 表達(da)量低(di)不(bu)易檢(jian)測(ce)；通(tong)過(guo)質(zhi)譜(pu)分(fen)析(xi)，確定(ding) V 蛋(dan)白(bai)的第(di) 145 位(wei)亮(liang)an酸(suan)是關鍵(jian)作(zuo)用(yong)位(wei)點(dian)（突變(bian)後拮抗能力下降 80%）。

階(jie)段(duan)逃逸(yi)差(cha)異：對比(bi)研究顯(xian)示(shi)，冠(guan)狀(zhuang)病毒在(zai) MDCK-XF04 中主(zhu)要通過(guo) ORF3a 蛋(dan)白(bai)降解(jie) MX1（降解(jie)效(xiao)率(lv) 60%），而在(zai) MDCK-XF03 中則通過(guo) N 蛋(dan)白(bai)阻(zu)斷 IRF3 激活(huo)（抑(yi)制率 55%），同(tong)壹(yi)病毒的(de)逃(tao)逸(yi)機(ji)制因(yin)宿(xiu)主(zhu)免疫階段不(bu)同(tong)而分(fen)化，為多(duo)階段(duan)抗病du藥物(wu)設(she)計(ji)提供(gong)依(yi)據。

IRF9 激(ji)活(huo)劑(ji)的精(jing)準(zhun)篩(shai)選：建立基於 ISG 表(biao)達(da)的高通(tong)量模(mo)型，某(mou)黃酮類(lei)化合(he)物(wu)可促進(jin) ISGF3 復(fu)合(he)物(wu)形成(cheng)（效(xiao)率(lv)提升(sheng) 3 倍），在(zai) MDCK-XF04 中使(shi) MX1 表達(da)量增(zeng)加(jia) 4 倍(bei)，對流(liu)感(gan)病毒的(de)後(hou)期抑(yi)制率達(da) 90%（MDCK-XF03 中因(yin)作(zuo)用(yong)階段不(bu)匹(pi)配(pei)，抑(yi)制率僅(jin) 35%）；動(dong)物(wu)實驗(yan)顯示(shi)該(gai)藥(yao)物(wu)可使(shi)犬腎臟病毒載(zai)量(liang)在(zai)感染後(hou) 48 小(xiao)時(shi)下降 10⁶倍(bei)，優(you)於 MDCK-XF03 篩(shai)選的(de)早(zao)期激活(huo)劑(ji)。

聯合(he)用(yong)藥階段優(you)化(hua)：將(jiang) MDCK-XF03 篩(shai)選的(de)早(zao)期激活(huo)劑(ji)與 MDCK-XF04 篩(shai)選的(de)效(xiao)應(ying)增強(qiang)劑(ji)聯用(yong)，形成(cheng) “0-12 小時 - 24 小時" 的免疫調控窗口(kou)，犬(quan)冠狀(zhuang)病毒清除時(shi)間(jian)縮短至(zhi) 4 天(tian)（單獨(du)用(yong)藥組(zu)為 7-8 天(tian)），且(qie)可減少病毒反(fan)彈(dan)（反(fan)彈率(lv)下降 80%），體(ti)現階(jie)段(duan)互補的治(zhi)療(liao)優(you)勢(shi)。

優(you)勢(shi)：

局(ju)限性(xing)：