MDCK-XF03犬腎細胞系為穩(wen)定表達 IRF3 的(de)上(shang)皮細胞系，貼(tie)壁生長，增(zeng)強 I 型(xing)幹擾(rao)素(su)應答，適(shi)用於(yu) IRF3 通(tong)路機(ji)制、病毒免疫逃(tao)逸及(ji)免(mian)疫(yi)調節(jie)劑篩選研究(jiu)。

早(zao)期幹擾(rao)素(su)通(tong)路激活：IRF3 在病毒感染(ran)後(hou) 1 小(xiao)時(shi)即(ji)發生磷酸化（MDCK-XF02 的(de) IRF7 激活始(shi)於(yu) 3 小(xiao)時(shi)），核轉(zhuan)移效率達 60%（野(ye)生型(xing)為 20%，MDCK-XF02 為 15%），可快(kuai)速(su)啟(qi)動 IFN-β 分泌(mi)，感染(ran)後(hou) 6 小(xiao)時(shi) IFN-β 含(han)量(liang)達 420pg/10⁶細胞（是(shi)野(ye)生型(xing)的(de) 4 倍，MDCK-XF02 同(tong)期為 280pg）；下(xia)遊抗病毒基因(yin)（如(ru) PKR、ISG15）的(de)表達峰值比 MDCK-XF02 提(ti)前 4 小(xiao)時(shi)，體(ti)現(xian) “早(zao)期預警(jing)" 功能，與 IRF7 的(de)後期(qi)放大作用形成(cheng)時(shi)序(xu)互補。

病毒早(zao)期復(fu)制抑(yi)制：對(dui)犬(quan)流感病毒的(de)吸(xi)附(fu)後抑(yi)制率(lv)達 70%（MDCK-XF02 為 30%），可阻斷(duan)病毒脫殼過(guo)程（抑(yi)制率(lv) 65%），使(shi)病毒復制的(de) “eclipse 期" 延(yan)長至 8 小(xiao)時(shi)（野(ye)生型(xing)為 4 小(xiao)時(shi)，MDCK-XF02 為 6 小(xiao)時(shi)）；培(pei)養上(shang)清(qing)中(zhong)病毒滴度(du)在(zai)感染(ran)後(hou) 12 小(xiao)時(shi)僅(jin)為 10⁴.⁵ TCID₅₀/mL（是(shi) MDCK-XF02 同期(qi)的(de) 1/5），但後(hou)期抑(yi)制效果(guo)弱(ruo)於(yu) MDCK-XF02（24 小(xiao)時(shi)後(hou)抑(yi)制率(lv)降至 50%），體(ti)現(xian) IRF3 的(de)早(zao)期防(fang)控特(te)征(zheng)。

模(mo)式識別受(shou)體(ti)協同：與 MDCK-XF02 的(de) IRF7 不同(tong)，其(qi) IRF3 可與 RLR 家族（RIG-I、MDA5）直接相互作用(yong)（結(jie)合(he)常(chang)數(shu) 2.8×10⁻⁹M），病毒 RNA 識別效率提(ti)升 3 倍，在 TLR 通(tong)路被抑(yi)制時(shi)仍(reng)能維持 60% 的(de)幹擾(rao)素(su)應答（MDCK-XF02 在(zai)此(ci)條(tiao)件(jian)下(xia)應(ying)答下(xia)降 80%），顯(xian)示其(qi)在 RNA 病毒識別中的(de)核心作用(yong)。

病毒識別 - 信號(hao)傳(chuan)遞(di)軸解析(xi)：利(li)用(yong) MDCK-XF03 的(de)早(zao)期激(ji)活特(te)性(xing)，發(fa)現(xian) MDA5 識別冠狀(zhuang)病毒 RNA 後，通(tong)過(guo) MAVS 適(shi)配器(qi)與 IRF3 形(xing)成(cheng)復合(he)物（半(ban)衰期(qi) 15 分鐘(zhong)），該復(fu)合(he)物在(zai)感染(ran)後(hou) 30 分鐘(zhong)即可結合(he) IFN-β 啟(qi)動子（MDCK-XF02 因(yin) IRF7 激活滯後無(wu)法捕捉(zhuo)）；敲(qiao)除(chu) IRF3 後，早(zao)期幹擾(rao)素(su)應答下(xia)降 90%，證(zheng)實(shi)其(qi)在免(mian)疫啟(qi)動中(zhong)的(de)不可替代性(xing)。

IRF3 與 IRF7 的(de)功能協作：通(tong)過(guo)共培(pei)養實驗(yan)發現(xian)，IRF3 激活的(de) IFN-β 可誘(you)導 IRF7 表達（兩(liang)者(zhe)表達量(liang)呈正(zheng)相關，R²=0.89），而(er) IRF7 反(fan)過(guo)來(lai)可穩定 IRF3 的(de)磷酸化狀(zhuang)態（延(yan)長半(ban)衰期(qi) 2 倍），在(zai) MDCK-XF03 中(zhong)人為阻斷(duan) IRF3 後(hou)，MDCK-XF02 的(de) IRF7 激活效率下(xia)降 60%，揭(jie)示兩(liang)者(zhe) “先(xian)啟(qi)後放(fang)" 的(de)協同(tong)關系(xi)。

脫殼階(jie)段的(de)拮(jie)抗策略：在(zai) MDCK-XF03 中(zhong)發現(xian)，犬冠(guan)狀(zhuang)病毒 N 蛋白可與 IRF3 的(de)磷酸化位(wei)點(dian)結合(he)（競(jing)爭(zheng)性(xing)抑(yi)制），使(shi)核轉(zhuan)移效率下(xia)降 70%（該(gai)現(xian)象在(zai) MDCK-XF02 中(zhong)因(yin)後期(qi)激(ji)活不易(yi)觀(guan)察）；通(tong)過(guo)冷(leng)凍電(dian)鏡(jing)觀(guan)察，該(gai)相互作用(yong)可同時(shi)促(cu)進病毒核衣殼(ke)釋放（效率提(ti)升 40%），實現(xian) “逃逸免(mian)疫(yi)" 與 “自(zi)身(shen)復制(zhi)" 的(de)雙(shuang)重(zhong)獲益(yi)。

時(shi)序(xu)性(xing)逃(tao)逸差(cha)異(yi)：對比(bi)研究(jiu)顯(xian)示，流感病毒在 MDCK-XF03 中主要通(tong)過(guo) NS1 蛋(dan)白(bai)阻斷(duan) IRF3 磷酸化（早(zao)期策略），而(er)在(zai) MDCK-XF02 中(zhong)則(ze)通(tong)過(guo)抑(yi)制 IRF7 核定位(wei)（後(hou)期策略），同(tong)壹(yi)病毒的(de)逃逸機(ji)制因(yin)宿主免疫(yi)激(ji)活時(shi)序(xu)不同(tong)而(er)分化(hua)，為多(duo)階(jie)段抗病du藥物設計提(ti)供依(yi)據(ju)。

IRF3 激(ji)活劑的(de)精準篩選：建立基於(yu)早(zao)期 IFN-β 分泌(mi)的(de)高通(tong)量(liang)模(mo)型(xing)，某合(he)成(cheng)肽(tai)可促進 IRF3 二聚(ju)化(hua)（效率提(ti)升 2.5 倍），在 MDCK-XF03 中使(shi)病毒早(zao)期復(fu)制抑(yi)制率(lv)達 85%（MDCK-XF02 中因(yin)作用(yong)時(shi)序(xu)不匹(pi)配，抑(yi)制率(lv)僅(jin) 40%）；動物實(shi)驗(yan)顯(xian)示該(gai)藥物可使(shi)犬(quan)呼吸(xi)道(dao)病毒載量(liang)在感染(ran)後(hou) 24 小(xiao)時(shi)下(xia)降 10⁵倍(bei)，優(you)於(yu) MDCK-XF02 篩選的(de)後期(qi)增(zeng)強劑。

聯(lian)合(he)用(yong)藥(yao)時(shi)序(xu)優(you)化：將(jiang) MDCK-XF03 篩選的(de)早(zao)期激(ji)活劑與 MDCK-XF02 篩選的(de)後期(qi)增(zeng)強劑聯(lian)用，形成(cheng) “1 小(xiao)時(shi) - 6 小(xiao)時(shi)" 的(de)免疫(yi)激活窗口，犬流感病毒清除(chu)時(shi)間縮短(duan)至 3 天(tian)（單(dan)獨用(yong)藥組(zu)為 5-6 天(tian)），且可減(jian)少耐(nai)藥株產(chan)生（突變(bian)率(lv)下(xia)降 70%），體(ti)現(xian)時(shi)序(xu)互補的(de)治(zhi)療(liao)優(you)勢(shi)。

優(you)勢(shi)：

局限性(xing)：